Zeitschrift für Rheumatologie – Supplement 1 - Deutsche ...

S74
Abstracts
Ergebnisse: VEGFR1 mRNA und Protein waren signifi kant höher in
RA- als in OA-Gefäßen exprimiert (p=0,0433). Id2 mRNA Expression
und Proteinsekretion war stärker in OA (p=0,0952). Keine signifi kante
mRNA Expression für die anderen analysierten Gene konnte mit Ausnahme
einer Tendenz für CD82 nachgewiesen werden, welches stärker
in OA exprimiert war (p=0,099). Die Quantifi zierung der Immunhistologie
im Lining zeigte, dass Id2 und CD82 verstärkt im RA-Lining
vorkommen (p=0,0079 und 0,0317). Bezüglich der medikamentösen
Behandlung der Patienten, wurde eine erhöhte VEGF-Expression bei
RA-Patienten, die oral Prednisolon erhalten hatten im Vergleich zu
RA-Patienten ohne Prednisolon, festgestellt.
Diskussion: Die Experimente zeigen, dass mittels LMM selektiv die perivaskuläre
Genexpression von Angiogenese-regulierenden Molekülen
darstellbar ist. VEGF, ein wichtiger Faktor für Angiogenese, weist eine
deutliche Relation zur RA-Pathogenese auf. Die erhöhte VEGFR-1 Expression
in synovialen RA-Gefäßen verdeutlicht die gesteigerte Angiogenese.
Im Gegensatz dazu ist Id2, welches durch Hypoxie im RA-Synovium
hochreguliert ist, geringer in RA Mikrogefäßen exprimiert und
konnte vermehrt im RA-Lining gemessen werden. Dies bestärkt das
Konzept, dass Id2 im RA-Synovium nur in hypoxischen Bereichen der
Invasion, aber nicht peripher eine pathophysiologische Rolle spielt.
POFER-3
Potent regulatory eff ect but disturbed distribution of regulatory
t-cells in synovial tissue of RA- patients?
Behrens F. 1 , Himsel A. 1 , Rehart S. 2 , Stanczyk J. 3 , Riemann J. 1 , Gay S. 3 ,
Möller B. 4 , Radeke H H. 1
1 Rheumatology and pharmazentrum Frankfurt and ZAFES, J.W. Goethe-
University, Frankfurt, Germany, 2 Orthopaedic Surgery, Friedrichsheim
Foundation, Frankfurt, Germany, 3 Rheumatology, University Zürich,
Switzerland, 4 Rheumatology, University Berne, Switzerland
Background: RA is characterized by accumulation of T cells in synovial
membranes and Th 1-derived IFN-γ. Recent investigations demonstrated
regulatory CD4+T cells in synovial fl uid (SF). Impaired function
of regulatory T cells has been discussed, but to be eff ective Treg need
to mediate their anti-infl ammatory activity in the synovial tissue (ST).
Objectives: To search for the presence and function of Tregs in RA- ST,
SF, and autologous peripheral blood (PB). To detect IFN-γ secretion
and their modulation in primary synovial tissue cell (STC) cultures by
co-culture with autologous PB CD4+T cells. To analyse the distribution
of T-bet+, respectively IFN-γ-producing lymphocytes and Foxp3+,
respectively regulatory T cells at transcription level in ST, PB and SF.
Methods: Samples of 51 RA patients were included. ST were obtained
by surgery and digested with collagenase. STC were incubated in anti-
IFN-γ or anti-IL-10 coated Elispot-plates. Experiments were modifi ed
by depletion of ST-T cells using anti-CD3 magnetic beads, and by adding
autologous PB CD4+. IFN-γ and IL-10 frequency was examined
by ELISPOT. Mononuclear cells (MC) from SF and PB were isolated
by Ficoll density gradient centrifugation. Total RNA of ST, PB, SF was
isolated. Real-time RT-PCR were performed by TaqMan® Gene Expression
Assays for Tbet, Foxp3, CD3epsilon and 18S rRNA. Tregs in ST
were identifi ed by immunohistochemistry for Foxp3.
Results: Frequency (FR; FR data mean throughout FR/10000 cultured
cells) of IFN-γ secreting cells in RA-ST was 64.6 ± 20.0(n=13; mean
± SEM). Non-stimulated IFN-γ FR of osteoarthritis tissue cells (OA-
STC) was determined to be 7.0 ± 2.5(n=5) being signifi cantly diff erent
(P=0.03). Mean basal IL-10 FR was 218.0 ± 94.0(n=5) in complete RA-
STC and 161.0 ± 86.0(n=4) from OA-STC; not signifi cantly diff erent
(P=0.9). CD3 depletion almost completely abrogated IFN-γ production
of RA-STC (mean FR 0.67 ± 0.55(n=3; P=0.01). PB CD4+ cells
were able to signifi cantly reduce the IFN-γ FR of STC cells. Th e mean
basal IFN-γ FR of PB CD4+ was 7.8 ± 3.4,(n=13) and the mean basal
IFN-γ FR of STC was 64.6 ± 20.0(n=13). Th e co-culture of these
STC with autologous PB-CD4+ led to a reduced IFN-γ FR of 37.6 ±
17.4 (n=13) signifi cantly (P = 0.002), while IL 10 was not signifi cantly
| Zeitschrift für Rheumatologie · Supplement 1 · 2006
changed by co-culture of STC and PB CD4+. As compared to PB and
SF, a high ratio of Tbet/Foxp3 was detectable in ST exclusively, which
correlated with a higher CD3epsilon mRNA, and a higher clinical disease
activity score.
Conclusion: Th ese experiments show that PB CD4+ T cells with regulatory
capacity of RA patients are potent inhibitors of IFN-gamma-expression
in RA-ST. In addition these data suggest a selective distribution
in RA. If these fi ndings can be further confi rmed they may elucidate,
why despite enhanced number of regulatory T cells in SF suppression
of infl ammation is insuffi cient.
POFER-4
Die Funktion der Adipozytokine Resistin, Adiponektin und Surfactant
Protein A als Entzündungsmodulatoren in der RA
Knedla A. 1 , Kampmann A. 1 , Schäffl er A. 2 , Büchler C. 2 , Seeger W. 3 , Günther
A. 3 , Müller-Ladner U. 1 , Neumann E. 1
1 Abt. Rheumatologie, JLU Gießen, Kerckhoff -Klinik, 2 Innere Med. I, Uniklinik
Regensburg, 3 Med. Klinik II, JLU Gießen
Hintergrund: Adipokine wie das Adiponektin beeinfl ussen neben dem
Energie-stoff wechsel auch Entzündungsreaktionen der Rheumatoiden
Arthritis (RA). Re-sistin zählt zur Familie der Cystein-reichen Proteine,
akkumuliert in entzündeten Gelenken von RA-Patienten und
bewirkt bei intraartikulärer Resistininjektion Synovitis mit Knorpelzerstörung
im Mausmodell. Surfactant Protein A (SP-A), ein Mitglied
der Collectin-Familie, wird als wesentlicher Bestandteil des Surfactant
v.a. in der Lunge exprimiert. Patienten mit RA weisen erhöhte SP-A
Konzentrationen in der Synovialfl üssigkeit und SP-A spezifi sche Autoantikörper
auf. SP-A besitzt auff ällige Homologien zu Adiponektin
und C1q. Die Funktion von Resistin und SP-A in der RA ist unklar, beeinfl
ussen möglicherweise jedoch Entzündungsreaktionen und Knorpelzerstörung.
Daher wurden die Auswirkungen von Resistin, SP-A
und Adiponektin auf Entzündungsfaktoren und Matrix-abbauenden
Enzymen in synovialen Fibroblasten(SF)untersucht.
Methoden: RASF wurden aus synovialen Biopsien von RA- und OA-
Patienten isoliert und unter Standardbedingungen bis zur Passage 4
kultiviert. Die Zellen wurden bei einer Konfl uenz von 70% mit unterschiedlichen
Konzentrationen an Resistin, SP-A und Adiponektin
stimuliert, um deren Einfl uss auf die Expression von Zytokinen und
MMPs mittels ELISA zu untersuchen.
Ergebnisse: Resistin induziert die Expression von IL-6 und IL-8 in
OASF (1.7-, 5.2-fach), in RASF nur gering und nicht signifi kant (1.1-,
1.4-fach). Adiponektin induzierte diese Zytokine ebenfalls (8.3-,
11-fach in RASF). Resistin reduzierte die Expression von Activin in
RASF (2.5-fach), hatte aber keinen Eff ekt in OASF. Im Gegensatz zum
Adiponektin, dass die TIMP-1-Expression in RASF induziert (2-fach),
hatte Resistin keinen Eff ekt. Adiponektin induziert die Sekretion von
MMP-3 und proMMP-1 in RASF (10-, 8.2-fach), Resistin zeigte keine
Wirkung auf die Expression von MMP-3, TNF-alpha und IL-12. Eine
Stimulierung mit SP-A zeigte keine signifi kanten Änderungen.
Zusammenfassung: Die Daten zeigen, dass sowohl Resistin als auch
Adiponektin, nicht aber SP-A, die Entzündungsreaktion der RA beeinfl
ussen, indem sie die Bildung von proinfl ammatorischen Zytokinen
und MMPs in SF induzieren.