Zeitschrift für Rheumatologie – Supplement 1 - Deutsche ...

S82
Abstracts
fötalen und adulten Geweben als auch in Tumorzell-Linien nachzuweisen
und mittels Real-Time PCR zu quantifi zieren. Um die Proteinase 3
selbst zu detektieren, wurden Immunoblots und immunhistochemische
Untersuchungen an fötalen und adulten Geweben durchgeführt.
Ergebnisse: Unsere Expressionsstudien ergaben, dass PR3-mRNA
nicht nur im Knochenmark und in Geweben mit hämatopoetischen
Stammzellen nachzuweisen war. So konnte PR3-mRNA in zahlreichen
fötalen Organen und Tumorzell-Linien nachgewiesen werden. Diese
Befunde konnten durch die immunologische Detektion der PR3 in diesen
Geweben bestätigt werden.
Schlussfolgerungen: Unsere Resultate zeigen, dass die PR3-Expression
nicht nur auf myeloide Zellen reduziert ist sondern auch in nicht-hämatopoetischen
Zellen exprimiert wird. Insbesondere die Expression
in fötalen Organen und Tumoren, weißt auf wichtige zusätzliche physiologische
und pathophysiologische Funktionen im Rahmen der Embryonalentwicklung
und Tumorgenese hin. Die neu entdeckten (patho-)physiologische
Rolle dieses Proteins lassen auch die Pathogenese
der Wegener’schen Granulomatose und die Enstehung bestimmter Tumoren
in einem neuen Licht erscheinen.
POFER-24
Advanced glycation endproducts bedingen eine funktionelle Einschränkung
osteoblastärer Zellen
Hein GE. 1 , Müller A. 1 , Franke S. 1 , Mückley T. 2 , Roth A. 3 , Wolf G. 1 , Siggelkow
H. 4 , Hellmich D. 1
1 Klinik für Innere Medizin III, Friedrich-Schiller-Universität Jena, 2 Klinik für
Unfall-, Hand- und Wiederherstellungschirurgie, Friedrich-Schiller-Universität
Jena, 3 Orthopädische Klinik des „Rudolf Elle“ Krankenhauses Eisenberg,
4 Gastroenterologie & Endokrinologie, Georg-August-Universität Göttingen
Hintergrund: Advanced glycation endproducts (AGE`s) sind chemische
Modifi kationen von Proteinen durch Carbohydrate bzw. deren
metabolische Intermediate, die während der so genannten Maillard-
Reaktion gebildet werden. Die Generation von AGE`s ist ein zwangsläufi
ger Prozess in vivo. Ihre Generation wird aber verstärkt u. a. durch
oxydativen Stress.
Jeder Osteoporose liegt pathogenetisch ein gestörtes Knochenremodelling
zugrunde.
Es ist bekannt, dass AGE`s die Proliferation und Diff erenzierung diff erenter
Zellen und auch deren Funktionalität beeinfl ussen. AGE-Rezeptoren
sind an osteoblastären Zellen gesichert worden.
Fragestellung: In den vorliegenden Untersuchungen sollte geprüft werden,
ob AGE-BSA die funktionelle Kapazität von osteoblastären Zellen
in vitro beeinfl ußt. Immortalisierte osteoblastäre Zellen eines 21 Jahre
alten Mannes mit Osteosarkom (HOS-58-Zellen) wurden für die Untersuchungen
eingesetzt. Die Hälft e der Zellen wurde mit Ascorbinsäure,
1,25(OH)2D3 und Beta-Glycerolphosphat stimuliert. Nach Inkubation
mit entweder glykiertem BSA (AGE-BSA) oder nicht glykiertem
BSA (Co-BSA) wurde die Genexpression von Osterix, Osteocalcin und
alkalischer Phosphatase mittels PCR gemessen.
Resultate: Alkalische Phosphatase: Sowohl in den unstimulierten als
auch in den stimulierten Zellen führte die Inkubation mit AGE-BSA
zu einer signifi kanten Hemmung der Genexpression.
Osteocalcin: Unter unstimulierten Bedingungen war die Genexpression
durch die AGE-BSA-Inkubation nicht beeinfl usst. In den stimulierten
Zellen zeigte die Osteocalcin-Genexpression allerdings eine
signifi kante Reduktion.
Osterix: Eine AGE-Inkubation führte unter unstimulierten Konditionen
nur zu einer leichten Hemmung der Genexpression, in den stimulierten
Kulturen war dieser Eff ekt signifi kant.
Zusammenfassung: Im Gegensatz zu nicht-glykiertem BSA ist AGE-
BSA in der Lage, die Genexpression wichtiger osteoformativer Proteine
zu hemmen.
Auf diesem Wege könnte also der Prozeß der Knochenformation im
„bone remodeling“ gestört werden. Die Intensität der Hemmung ist
Dosis-abhängig wobei mehrere Phasen der Diff erenzierung beeinfl usst
| Zeitschrift für Rheumatologie · Supplement 1 · 2006
werden. Der Eff ekt tritt off enbar erst unter einem lang dauernden Einfl
uß von AGE-BSA auf die Zellen auf.
POFER-25
Die Proteinase 3 (PR3) als Autoantigen im Vascultitis-Tiermodell
Relle M. 1 , Reifenberg K. 2 , Galle PR. 1 , Schwarting A. 1
1 I. Medizinische Klinik und Poliklinik, Uniklinikum Mainz, Mainz, 2 ZVTE der
JoGu-Universität Mainz, Mainz
Zielsetzung: Die Wegener sche Granulomatose(WG) ist eine organ-
und lebensbedrohende Autoimmunerkrankung unbekannter Ätiologie.
Zirkulierende Antikörper gegen die Serinprotease Proteinase 3
(PR3) neutrophiler Granulozyten (ANCA, antineutrophil cytoplasmic
antibodies) sind ein wichtiges krankheitsspezifi sches Merkmal der
WG. Zum besseren Verständnis dieser Erkrankung und der Vaskulitiden
insgesamt, wäre es wüschenswert ein verlässliches murines Vaskulitismodell
zu etablieren.
Methoden: Da nur wenig über das murine Homolog der humanen
PR3 bekannt ist, war es notwendig die Expression der murinen PR3
zu untersuchen. Ausgehend von den Expressiondaten der murinen
PR3, wurde ein transgenes Mausmodell entwickelt. Hierbei wurde ein
DNA-Konstrukt hergestellt, welches eine nierenspezifi sche Expression
humaner PR3 in der Mausniere ermöglicht. Die Injektion anti-human
PR3-spezifi scher Antikörper in die transgenen Tiere soll im weiteren
Versuchsverlauf klären, ob PR3-spezisiche Autoantikörper (PR3-
ANCA) direkt oder über ein zusätzliches infl ammatorisches Signal
eine Glomerulonephritis auslösen können.
Ergebnisse: Durch unsere Untersuchungen konnte gezeigt werden,
dass sich das Expressionsmuster der murinen PR3 in wesentlichen
Punkten von dem der humanen PR3 unterscheidet, woraus sich Funktionsunterschiede
bezüglich der homologen Enzyme ableiten lassen.
Mittlerweile stehen genügend Human-PR3-transgene Tiere zur weiteren
Züchtung und Analyse bereit. Die Eff ekte einer ANCA-PR3-Interaktion
infolge einer Injektion anti-human-PR3-spezifi cher Antikörper
werden zur Zeit untersucht. Hierbei ist vor allem von Interesse,
ob die Bindung der Antikörper an die glomerulär exprimierte PR3 zu
morphologischen Veränderungen der Niere führt („Crescent-Formation“)
und eine Nephritis auslöst.
Schlussfolgerung: Unsere Untersuchungen zur Expression der Maus-
PR3, sowie ein funktionierendes Vaskulitis-Mausmodell bieten das
Rüstzeug zum besseren Verständnis der Pathologie der Wegener’schen
Granulomatose und stellen die Basis zur Entwicklung einer Kausaltherapie
dieser lebensbedrohlichen Erkrankung dar.
POFER-26
PDGF-BB induces TGF-β pathway gene expression
in synovial fi broblasts – stronger eff ects in rheumatoid arthritis
than in osteoarthritis
Pohlers D. 1 , Beyer A. 2 , Koczan D. 3 , Wilhelm T. 2 , Thiesen HJ. 3 , Kinne RW. 1
1 Arbeitsgruppe Experimentelle Rheumatologie, Klinik für Orthopädie,
Friedrich-Schiller-Universität Jena, Eisenberg, 2 Leibniz Institut für Altersforschung
– Fritz Lipmann Institut (FLI), Jena, 3 Institut für Immunologie,
Universität Rostock, Rostock
Diff erential gene expression was investigated in early-passage RA- and
OA-SFB (n = 6 each) before/aft er stimulation with PDGF-BB using
Aff ymetrix® arrays; mRNA/protein data were validated by real-time
RT-PCR and/or western blots.
Using Aff ymetrix® arrays, RA-SFB showed constitutive upregulation of
components of the TGF-β/BMP-pathway TGF-β1, its receptor TβRI,
the TGF-β binding proteins LTBP1/2, the TGF-β-releasing thrombospondin
1 (Tsp1), and the smad-associated molecule SARA (foldchange
between 1.2 and 3.4), but downregulation of BMP-7 and BMP-4
(fold-change of 0.5 and 0.4). Constitutive upregulation of TGF-β1 and
Tsp1 in RA-SFB was confi rmed by real-time PCR. Following PDGF-