Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...

104 Arbeitsvorschriften
Photodiodenarraydetektor SPD-M6A mit Class M10A Software (Shimadzu, Duisburg)
Elektrochemische Detektion:
Messzelle TRACE Flowcell (TRACE Biotech AG, Braunschweig)
Elektroden (alle TRACE Biotech AG, Braunschweig)
Platin 1-Kanal
Gold 1-Kanal
Kupfer 1-Kanal
Graphit 1-Kanal
Elektrochemischer Detektor Bioanalytical Systems BAS LC-4B (Axel Semrau,
Sprockhövel)
(Die HPLC-Anlage wurde ohne Säule mittels Salpetersäurelösung (30%) 30 Min.
passiviert.)
5.2.4 Durchführung der Analysen
Probenvorbereitung
20,0 +/- 0,1 g Milch (evtl. dotiert*) wurden in ein Zentrifugenglas eingewogen und 1,25
ml Acetonitril zupipettiert. Die Probe wurde mit dem Vortex 20 s durchmischt und 10
min im Ultraschallbad behandelt. Nach Abkühlen der Proben im Eisbad auf ca. 4 °C
erfolgte die Entfettung durch Zentrifugation bei 4 °C, 25 min und 2.500 g. Mit einem
Spatel wurde die Fettschicht entnommen, die entrahmte Milch kräftig per Hand
geschüttelt.
Danach erfolgte die Ultrafiltration mit einer Rührzelle. Die ersten 2 ml Filtrat wurden
verworfen, anschließend 3 ml in ein Probenröhrchen filtriert und danach das erhaltene
Ultrafiltrat (2 ml) zur Analyse eingesetzt. Die restliche Milch wurde verworfen und die
UF-Apparatur gründlich mit einer Tensidlösung für die nächste Ultrafiltration gereinigt.
* Zum Dotieren wurde zu 20 g Probe soviel Spikelösung mittels Enzympipette
zugesetzt, dass die Konzentration an Isoxazolylpenicillin bspw. 15 µg/kg (0,5 x MRL),
30 µg/kg (MRL) und 60 µg/kg (2 x MRL) betrug. Die dotierte Milch wurde gut
geschüttelt und die Probe 10 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen.
Anschließend erfolgte die Probenaufarbeitung.