Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...
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18 Theoretischer Teil<br />
Mikrobielle Hemmstofftests<br />
Zu den gebräuchlichsten Hemmstofftests zählen der Dreiplattentest gemäß<br />
Fleischhygienerecht [FleischhygieneVO, 2001] <strong>und</strong> der EU-Vierplattentest [Ellerbroek<br />
et al., 1994]. Der Zwölfplattentest nach L<strong>und</strong> ermöglicht eine vorläufige<br />
Stoffklassenidentifizierung [L<strong>und</strong>, 1986]. Hierbei handelt es sich um mikrobiologische<br />
Agardiffusionsverfahren. Weitere Hemmstofftests, die über bakterielle Produktion von<br />
z.B. Reduktionsäquivalenten oder Säuren auswerten, sind der<br />
Brilliantschwarzreduktionstest [Amtl. Sammmlung §35, L 01.00/11; IDF, 1991b], der<br />
Premi ® Test [Arts et al., 2000; Spörri <strong>und</strong> Stephan, 2000; Reybroeck, 2000], der<br />
Delvotest ® P oder SP [Suhren <strong>und</strong> Beukers, 1998] <strong>und</strong> der Charm Aim 96 ® [Korsrud et<br />
al., 1998].<br />
Rezeptortests<br />
Bekannte Rezeptortestverfahren sind der Charm II ® -Test, der Delvo-X-Press ® -Test, der<br />
Cite ® Probe-Test <strong>und</strong> der Snap ® test sowie der auf einer Enzymreaktion beruhende<br />
Penzym ® -Test [Bishop et al., 1992]. Beim Snap ® test <strong>und</strong> dem Cite ® Probe-Test beruht<br />
das Testsystem auf der Konkurrenzreaktion der Penicilline mit zugesetztem<br />
enzymmarkierten Penicillin um Rezeptoren an speziell präparierten<br />
Bakterienzellwänden, die auf einer Kunststoffmembran fixiert sind [Anonymous, 1994].<br />
Der Charm II ® -Test beruht auf der Reaktion eines spezifischen mikrobiellen Rezeptors<br />
von Bacillus stearothermophilus mit dem Wirkstoff, wobei 14 C-markierter Wirkstoff<br />
dabei mit Penicillinrückstand aus einer Probe um die Bindungsstellen konkurriert.<br />
Ausgewertet wird nach Entfernung des überschüssigen markierten Wirkstoffs über eine<br />
Szintillationsmessung [Carlsson <strong>und</strong> Björck, 1991; Charm, 1992; Charm Science Inc.,<br />
1998; Korsrud et al., 1996; Suhren <strong>und</strong> Heeschen, 1987].<br />
Beim Penzym ® -Test wird die D,D-Carboxypeptidase, welche die Peptidbindung von D-<br />
Alanyl-D-Alanin hydrolysiert, von Penicillinen irreversibel gehemmt. Freigesetztes D-<br />
Alanin wird mit D-Aminosäureoxidase zu Pyruvat oxidiert, wobei Wasserstoffperoxid<br />
entsteht, der in Gegenwart von Peroxidase den zugesetzten Farbindikator von gelb<br />
nach orange umschlagen lässt. Penicilline verhindern diesen Reaktionsweg [Everest et<br />
al., 1994; Frere et al. 1980; Suhren et al., 1996].
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