Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...

Theoretischer Teil 21
Kapillarelektrophorese (CE)
Auch die Kapillarelektrophorese wird zur Bestimmung von Penicillinrückständen
herangezogen. In der jüngsten Literatur befindet sich ein Überblick [van Schepdael und
Hoogmartens, 2000]. Die Kapillarelektrophorese wird auch in Kombination mit der
Massenspektrometrie eingesetzt [Ahrer et al., 2001; Hernandez, 1999].
Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC)
Die zur Quantifizierung der β-Lactam-Antibiotika am häufigsten verwendete
Bestimmungsart ist die Flüssigchromatographie. Zur Penicillinrückstandsanalytik
mittels HPLC findet man in der Literatur verschiedene Methodenzusammenstellungen
[Boison, 1995; Brandšteterová et al., 2000; Botsoglou und Fletouris, 2001; Petz, 1992].
Bei der Penicillinbestimmung wird mit Umkehrphasen-Chromatographie (Reversed
Phase, RP) gearbeitet. Als organischer Modifier dient vor allem Acetonitril und seltener
Methanol [Verdon und Couedor, 1998; Zomer et al., 1995], welcher mit einem Puffer im
pH-Bereich von 2 bis 7 zur mobilen Phase gemischt wird. Auch Gradientensysteme
[Kubalec et al., 1997; Tarbin et al., 1995] oder der Zusatz von Ionenpaarreagenzien zur
Erhöhung der Retention werden in der Literatur beschrieben [Hormazábal und
Yndestad, 1995; Muth et al., 1996; Takeba et al. 1998; Tyczkowska et al., 1994]. Als
Trägermaterial werden modifizierte Silicagele verwendet, vor allem C18- [Pérez et
al.,1997; Gee et al., 1996] oder C8-Materialien [Boison und Keng, 1998, Rose et al.,
1997a], aber auch cyano- und phenylsubstituierte bzw. modifizierte Silicagele und
Polymere, da letztere bessere chemische Stabilität, höhere Flussraten, bessere
Retention und Selektivität erreichen können [Moats und Leskinen, 1987; Ang und Luo,
1997]. Zur Detektion werden überwiegend UV-Detektoren verwendet [Furusawa,
2000]. Der UV-Bereich zur Messung der Penicilline liegt zwischen 200 und 230 nm; da
in diesem Bereich aber auch Matrixkomponenten adsorbieren, werden die Penicilline
häufig derivatisiert. Zur besseren Detektion der Analyten bei anderen Wellenlängen
werden Derivatisierungsreaktionen über eine photochemische Reaktion [Ibach und
Petz, 1998, Taguchi et al., 1999] durchgeführt, auch elektrochemische [Dasenbrock
und LaCourse, 1998; Lihl et al., 1996; Kirchmann et al., 1994] sowie Fluoreszenz-
Detektoren werden angewandt. Zur Bildung fluoreszierender Derivate werden
Fluorescamin [Hong und Kondo, 2000; Leroy et al., 1992], o-Phthaldialdehyd [Rogers
et al., 1984] oder 9-Fluorenylmethylchlorformiat [Shah und Adlard, 1988] eingesetzt. In