Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...

22 Theoretischer Teil
der Praxis sind vor allem zwei Methoden etabliert: Die Methode nach Boison und
Sørensen [Boison et al., 1991; Sørensen et al., 1997, Terada et al., 1985], deren
Grundlage von Bundgaard erarbeitet wurde [Bundgaard, 1971; Bundgaard und Ilver,
1972], setzt die Penicilline mit Quecksilberchlorid in Gegenwart von 1,2,4-Triazol um.
Es entsteht ein Quecksilbermercaptid-Komplex welcher bei > 300 nm im UV absorbiert.
Für amphotere Penicilline wie Ampicillin und Amoxicillin geht der Triazolmethodik eine
Benzoylierung oder Acetylierung voraus. Eine weitere Methode für die amphoteren
Penicilline ist die Derivatisierung mittels Formaldehyd und Trichloressigsäure (TCA)
[Ang und Luo, 1997] bzw. 2-Hydroxy-benzaldehyd (Salicylaldehyd) [Luo et al., 1997]
und anschließender Fluoreszenzdetektion.
Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS)
In der Flüssigchromatographie der Penicilline hat sich in den letzten Jahren die MS
oder MS n als Detektionsmöglichkeit durchgesetzt [Tyczkowska et al., 1994,
Blanchflower et al., 1994; Straub et al., 1994]. Der Vorteil der LC-MS liegt in der
weniger aufwendigen Probenvorbereitung, der Möglichkeit der Detektion ohne
vorhergehende Derivatisierung, der hohen Selektivität und Empfindlichkeit der
Methodik, im großen Probendurchsatz und in den verkürzten Analysenzeiten. Zur
eindeutigen Identifizierung der Analyten über MS n findet die LC-MS ihren Einsatz.
Nachteile sind die Beeinflussung der Quantifizierung durch Matrixeffekte, hohe
Anschaffungskosten der Geräte, die vergleichsweise aufwendige Technik, die
Einschränkung auf flüchtige Puffer und die Schwierigkeit untereinander vergleichbare
Spektrenbibliotheken zu erstellen. Als Ionisationstechnik wird in den Veröffentlichungen
zumeist die Elektrospray Ionisation (ESI) verwendet [Ang et al. 2000; Becker et al.,
2001; Bruno et al., 2001; De Baere et al., 2002; Daeseleire et al., 2000; Ito et al., 2001;
Riediker et al., 2001]. Bei der Elektrospray-Technik sind Flussraten von 0,001-1 ml/min
möglich, wobei Ionen unzersetzt in den Massenanalysator gelangen können. Es bilden
sich Quasi-Molekülionen [M+H] + oder [M+H] - bzw. Addukte, je nachdem, ob im Positivoder
Negativmodus gearbeitet wird. Mit der Elektrospray-Technik wurden ältere
Ionisationsverfahren abgelöst wie z.B. die Thermospray Ionisation [Siegel et al., 1987;
Suwanrumpha und Freas, 1989; Tyczkowska et al., 1989; Voyksner et al., 1991], Fast
Atom Bombardment (FAB) [Casy et al. 1989; Suwanrumpha et al., 1988], Particle
Beam Interface [Hurtaud et al., 1994] oder Plasmaspray [Ohki et al., 1992]. Auch ein
API Ion Spray-Verfahren ist beschrieben [Hormazábal und Yndestad, 1998]. Als