Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...

Arbeitsvorschriften 115
Aufarbeitung der Joghurtproben zur LC-MS/MS Messung
Wässrige Extraktion
Acetonitril-Extraktion
• Auftauen der Probe im Wasserbad bei 40 °C
• 20 g Joghurt verdünnt mit 20 g Reinstwasser
• Durchmischen mittels Vortex
• Zentrifugieren bei 2.500 g
• Überstand (30ml von den 40 ml) über SPE-Kartusche Oasis HLB 3 cc,
60 mg (Waters, Eschborn), nachwaschen mit 2 x 2 ml Wasser, aktiviert
mit 1. Methanol 2. Wasser
• Eluieren mit Acetonitril (2 ml)
• Zugabe von 1 ml 25 µM Phosphatpuffer pH 7
• Acetonitril mittels Stickstoffstrom einengen
• Filtration durch Filter Chromafil PET-20/15 MS, 20 µm Porenweite
(Macherey-Nagel, Düren)
• 20 g Joghurt verdünnt mit 20 g Acetonitril
• Durchmischen mittels Vortex
• Zentrifugieren bei 2500 g
• Abdekantieren des kompletten Überstands (Acetonitril/Wasser) in einen
Spitzkolben
• Zugabe von 5 ml gesättigter Natriumchloridlösung (vermindertes
Schäumen / verbesserte Phasentrennung)
• Filtrieren der Lösung über eine Kartusche mit porösem Polyethylen, 20
µm, 1/16“ (ict, Bad Homburg)
• Filtrierte Lösung über SPE-Kartusche Waters Oasis HLB 3 cc 60 mg
(Waters, Eschborn), nachwaschen mit 2 x 2 ml Wasser, aktiviert mit 1.
Methanol 2. Wasser
• Eluieren mit Acetonitril (2 ml)
• Zugabe von 1 ml 25 µM Phosphatpuffer pH 7
• Acetonitril mittels Stickstoffstrom einengen
• Filtration durch Filter Chromafil PET-20/15 MS, 20µm Poren (Macherey
Nagel, Düren)