Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...
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72 Experimenteller Teil<br />
Konkurrenzreaktion von freiem Antigen<br />
<strong>und</strong> festphasengeb<strong>und</strong>enem Antigen<br />
um verfügbare AK-Bindestellen<br />
Detektion festphasen-geb<strong>und</strong>ener<br />
antigen-spezifischer Antikörper<br />
durch enzymmarkierten<br />
Anti-Kaninchen-Antikörper<br />
primärer Antikörper sek<strong>und</strong>ärer Antikörper<br />
immobilisiertes Antigen � chromogenes Substrat<br />
freies Antigen<br />
E Enzym<br />
Abbildung 41: Indirekter ELISA [Abbildung entnommen aus: Schlösser, 2000]<br />
Zur Durchführung wurde das Antigen (Glucoseoxidase - Penicillin G - Konjugat) auf der<br />
ELISA-Platte immobilisiert. Durch den Kopplungsprozess unter alkalischen<br />
Bedingungen besitzt das Penicillin einen geöffneten β-Lactamring<br />
(Benzylpenicilloylderivat). Im zweiten Reaktionsschritt fand eine Konkurrenzreaktion<br />
zwischen immobilisiertem Antigen <strong>und</strong> dem in der zugegebenen Probe befindlichen<br />
freien Penicilloylderivat um die ebenfalls zugegebenen Antikörper statt<br />
(Primärantikörper, Antipenicillin-AK). Zur Detektion wurde ein indirekter Nachweis der<br />
geb<strong>und</strong>enen Antikörper mittels enzymmarkierter Sek<strong>und</strong>ärantikörper (Peroxidasemarkiertes<br />
Antikaninchen IgG) <strong>und</strong> anschließender Enzymreaktion durchgeführt [Bally<br />
<strong>und</strong> Gribnau, 1989; Usleber et al., 1994; Schlösser, 2000]. Eine grafische Darstellung<br />
des Prinzips zeigt Abbildung 41.
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