Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...
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Arbeitsvorschriften 117<br />
5.6.2 Reagenzienlösungen <strong>und</strong> Puffer<br />
Beschichtung:<br />
Glucoseoxidase-Penicillin G-Konjugat<br />
Herstellung : [Singh, 1985] 10 mg Glucoseoxidase<br />
20 mg Penicillin G Kaliumsalz<br />
in 2 ml PBS-Puffer mit 0,15 ml KOH 1 mol/l<br />
Dialyse über Nacht bei 4 °C<br />
Ergebnis der Proteinbestimmung (DC Protein Assay, BioRad, München):<br />
0,6 mg Protein / ml<br />
Kompetitor:<br />
Penicilloylsäure:(1:1.000)<br />
Herstellung: 10 mg Penicillin G Kaliumsalz bzw. Ampicillin in 9,8 ml Methanol<br />
mit 0,2 ml KOH 1 mol/l, 24 h bei Raumtemperatur, Lagerung bei<br />
–18°C, Verdünnung wie angegeben (1:1.000)<br />
Primärer Antikörper: (1:2.500)<br />
Antipenicillin AK, (Polyklonales Serum / Rb/Ig Fraction)<br />
Sek<strong>und</strong>ärer Antikörper: (1:3.000)<br />
Peroxidase-markiertes Antikanninchen IgG (1:3.000)<br />
(Anti Rabbit HRP 4)<br />
Substratlösung für Meerrettichperoxidase:<br />
3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidin in Citratpuffer<br />
(20 ml 0,21 mol Citratpuffer mit 1 ml 3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidinlösung)<br />
Beschichtungspuffer:<br />
Bicarbonatpuffer pH 9,4-9,8<br />
(Na2CO3 1,59 g <strong>und</strong> NaHCO3 2,93 g auf 1 l Reinstwasser)
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