Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...

114 Arbeitsvorschriften
5.5.2 Durchführung der Analysen
Für alle Analysen wurde Reinstwasser (MilliQ-Reinstwasseranlage, Millipore,
Eschborn) verwendet.
Wässrige Proben
Cloxacillin bzw Penicillin G (1 µg/ml) wurden mit Ameisensaüre (10 %) (VWR International,
Darmstadt) mit einem pH-Meter auf pH 2,3 eingestellt.
Cloxacillin bzw Penicillin G (1 µg/ml) wurden mit Milchsäure (10 %) (Baker, Deventer,
NL) mit einem pH-Meter auf pH 4,0 eingestellt.
Vergleiche: Reinstwasser, Wasser mit Ameisensäure pH 2,3, Wasser mit Milchsäure
pH 4, wässrige Lösungen von Penicillin G bzw. Cloxacillin
Milchproben
20 g H-Milch wurden mit 20 mg Cloxacillin bzw. Penicillin G (siehe 5.2.1.1) am Vortex
gemischt, mit einem pH-Meter auf pH 4 eingestellt, 3 Tage bei 4 - 6 °C gelagert und bis
zur Aufarbeitung bei -18 °C tiefgefroren (max. 1 Woche).
Vergleiche: Milch ohne Dotierung, Milch mit Dotierung ohne pH-Einstellung
Joghurtproben
Zur Herstellung der Proben siehe 5.4. Die Proben wurden 3 Tage bei 4 - 6 °C gelagert
und bis zur Aufarbeitung bei -18 °C tiefgefroren (max. 1 Woche).
Vergleiche: Joghurt ohne Dotierung, Joghurt dotiert mit Penicillin G bzw. Cloxacillin
nach der Fermentation; Milchproben mit Penicillin G bzw. Cloxacillin aufgearbeitet wie
Joghurt
Aufarbeitung der Milchproben zur LC-MS/MS Messung
• Auftauen der Probe im Wasserbad bei 40 °C
• Verdünnung der Probe mit Reinstwasser, 100 µl Probe auf 100 ml
Reinstwasser
• 5 ml zentrifugieren bei 2.500 g
• Abnehmen von 1 ml Probe
• Filtration durch Filter Chromafil PET-20/15 MS, 20 µm Porenweite
(Macherey-Nagel, Düren)