Untersuchungen zur Analytik und zum Einfluss technologischer ...

Theoretischer Teil 19
Immunchemische Tests
Die immunchemischen Methoden beruhen auf einer Antigen-Antikörper-Reaktion. In
der Penicillinanalytik wird aufgrund der Niedermolekularität der Analyten kompetitiv,
also durch eine Konkurrenzreaktion zwischen Antigen und dem Zielanalyten, gearbeitet
[Cliquet et al., 2001; Märtlbauer, 1993]. Bei den immunchemischen Tests werden
kommerziell erhältliche, bspw. der LacTek ® -Test [Mitchell, et al., 1999] oder der
Parallux ® -Test [Huth et al., 2002] angeboten. Man verwendet als Marker radioaktive
Isotope (RIA - Radio Immuno Assay), Enzyme (ELISA - Enzyme Linked
Immunosorbent Assay) oder fluoreszierende Verbindungen (FIA – Fluoreszenzimmunoassay).
Ebenso sind Immunfiltrationstests [Beier und Stanker, 2000] oder auch
das Biocore-System (Surface Plasmon Resonance Technology), das mit spezifischen
Sensoroberflächen arbeitet, im Einsatz [Schindler, 2000]. Für Isoxazolylpenicilline in
Milch wurde ein spezifischer ELISA entwickelt [Usleber et al., 1994].
1.2.9.2 Chemisch-physikalische Trennmethoden
Probenvorbereitung
Um Penicillinrückstände mit den gewünschten Qualitätskenndaten des
Analysenverfahrens wie genügend hoher Spezifität und Selektivität bestimmen zu
können, ist meist eine Probenvorbereitung nötig.
Die Probenaufarbeitung lässt sich in die Punkte Probenzerkleinerung (incl.
Durchmischung und Homogenisierung), Spaltung von adsorptiven Bindungen,
Deproteinierung, Extraktion, Reinigung und gegebenenfalls Vorsäulenderivatisierung
einteilen [Petz, 1984].
Die repräsentativ genommene Probe muss zunächst homogenisiert werden. Dann
kann durch sogenannte „Releasing solvents“ die adsorptive Bindung (Punkt 1.2.6.)
zwischen Penicillinen und Proteinen gespalten werden. Solche „Releasing solvents“
sind Aceton oder Acetonitril [Tyczkowska et al., 1989]. Es schließt sich eine
Präzipitation der Proteine an; beides kann auch in einem Schritt erfolgen. Wirksame
Lösemittel bei der Proteinfällung sind Acetonitril [Boatto et al., 1998; Gee et al., 1996;
Lihl und Petz, 1994; Moats und Harik-Khan, 1995], Aceton [Hormazábal und Yndestad,
1995; Tarbin et al., 1996] und Dichlormethan [Fletouris et al., 1992]. Andere
Möglichkeiten der Deproteinierung sind die Ultrafiltration [Ibach und Petz, 1998;
Furusawa, 2000; Muth et al., 1996; Voyksner et al., 1991] und die Dialyse [Imerman et