Identifikation und immunologische Charakterisierung von MHC ...

5. Diskussion
Bei Beginn des dargelegten Projekts waren erst wenige MHC-II-abhängige
Peptidepitope in der Literatur beschrieben (Knutson et al., 2001; Wang, 2001;
Schuler-Thurner, 2002; Yu and Restifo, 2002) und in klinischen
Vakzinierungsversuchen eingesetzt worden (Slingluff et al., 2001; Brossart et
al., 2000). Für die Identifizierung von TA-spezifischen T-Lymphozyten musste
daher eine Methode etabliert werden, die mittels Peptiden eine zuverlässige in
vitro-Stimulation und immunologische Charakterisierung von TA-spezifischen
CD4+ T-Lymphozyten erlaubte. Trotz vielfacher Austestung der
Zusammensetzung des Zellkulturmediums (Peptidkonzentration, Serum,
Zytokine), der Zellaufbereitung (unselektierte PBMC versus CD4+
T-Lymphozyten), der initialen Stimulationsdauer, des Zellkulturformates
(„bulk“- versus „split well“-Kulturen), sowie der optimalen antigen-
präsentierenden Zellen (Monozyten/Makrophagen/B-Lymphozyten aus
PBMC oder DC; Peptid gepulst oder direkt der Kokultur zugesetzt) gestaltete
sich die Generierung von peptidspezifischen CD4+ T-Zelllinien ausgesprochen
schwierig, da diese durch ein Überwachsen der Kulturen mit unspezifischen
T-Zellen ihre Antigenspezifität rasch verloren. Erst die Klonierung der
T-Zellen mittels „limiting dilution“ unmittelbar nach der initialen Stimulation
unter serum- und zytokinfreien Bedingungen ermöglichte die Expansion von
peptidspezifischen CD4+ T-Zellen, die anschließend in Folgeversuchen näher
charakterisiert wurden.
Ein potentieller Einsatz von Peptidepitopen in der Immuntherapie hängt
entscheidend davon ab, dass die peptidspezifischen CD4+ T-Lymphozyten auf
das entsprechende Antigen reagieren. Die Erkennung des natürlich
prozessierten Proteinantigens in Form von „genuinen“ oder „echten“ Epitopen
wird prinzipiell von diversen Faktoren beeinflusst. – Die intrazelluläre
Antigenverarbeitung in MHC-II-bindende Peptidepitope spielt eine wichtige
Rolle. APC nehmen TA über Endo-, Phago- oder Pinozytose aus
abgestorbenen Tumorzellen in intrazelluläre Vesikel (Endosomen) auf (Pieters,
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