Identifikation und immunologische Charakterisierung von MHC ...

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4. Ergebnisse P216 400 – 2000 nM P235 1000 – 2000 nM P239 1000 – 3000 nM Tabelle 4.4: Halbmaximale Proliferationsaktivität der peptidspezifischen T-Zellklone. Für eine Immuntherapie von Tumoren mit spezifischen T-Helferzellen ist es unerlässlich, dass die peptidspezifischen T-Zellklone das Epitop aus natürlich prozessiertem Proteinantigen erkennen. Die Prozessierung und Präsentation der SVN-Peptidepitope aus natürlichem Antigen wurde durch Kokultivierung peptidspezifischer T-Zellklone mit SVN-Protein-gepulsten DC untersucht. Eine Analyse von PR3-peptidspezifischen-T-Zellklonen auf natürliches Antigen erfolgte durch Kokultivierung von peptidspezifischen T-Zellklonen mit Ad5/F35- Virus transduzierten DC. Wie in 4.2 beschrieben, enthält der Virus die kodierende Sequenz für PR3-LAMP-1, welches nach Transduktion in DC exprimiert wird. Lediglich für das SVN-Peptid S10 zeigte sich eine spezifische T-Zellproliferation bei Exposition mit rekombinanten SVN-Protein (Abb. 4.12). Dies wurde an drei S10-spezifischen T-Zellklonen von unterschiedlichen Spendern gezeigt. Für die PR3-spezifischen T-Zellklone konnte keine spezifische Proliferation auf das natürliche Antigen nachgewiesen werden. 75
4. Ergebnisse medium S10 SVN + anti-HLA-DR (HB-55) + anti-HLA-ABC (HB-95) + anti-HLA DR,DQ (HB-180) HOPC Klon Gö11-3/4-S10.4 0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 Abb. 4.12: Erkennung von rekombinantem Protein durch S10-spezifische T-Zellklone (exemplarisch Klon Gö11-3/4-S10.4). Für die restlichen peptid-spezifischen T-Zellklone konnte keine Proteinerkennung nachgewiesen werden. Die SVN-peptid-spezifischen Klone wurden mit Protein-gepulsten (SVN oder einem irrelevanten Immunglobulin „HOPC“) und Peptid-gepulsten autologen DC kokultiviert; die PR3-peptid-spezifischen Klone mit transduzierten DC ( Ad5/F35- PR3-LAMP oder AD5/F35-GFP) und Peptid-gepulsten autologen DC (nicht gezeigt). Entsprechend der bekannten HLA-Restriktion des S10-Epitops (Abb. 4.9) konnten die proliferativen T-Zellreaktionen auf das hSVN-Protein durch einen humanen HLA-DR-Antikörper inhibiert werden. Der Proliferationsnachweis erfolgte mittels [ 3H]-Thymidin-Einbau 72 h nach Stimulation (cpm: counts per minute). Tumorantigene von apoptotischen oder nekrotischen Tumorzellen werden in vivo von APC internalisiert, MHC-II-abhängig prozessiert und an CD4+ T-Zellen präsentiert. Zur T-Zellerkennung des genuinen S10-Epitops wurden demzufolge DC mit Tumorzelllysaten von verschiedenen SVN-positiven Tumorzelllinien gepulst. Für das S10-Epitop ließ sich von den Tumorzelllinien Karpas-422, Jurkat und HL-60 eine direkte in vitro-Erkennung von Lysat-gepulsten DC nachweisen cpm 76
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Identifikation und immunologische C
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Abstract: CD4+ T cells play importa
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Kurzreferat: CD4+ T-Zellen spielen
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Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichn
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3.1.5 Bestimmung der Zytokinprodukt
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7.2 Abbildungsverzeichnis .........
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Abbkürzungsverzeichnis cpm counts
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Abbkürzungsverzeichnis TBS Tris-ge
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1. Einleitung von dem seiner nicht-
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1. Einleitung thymusabhängige Tole
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Seite 97 und 98: 4. Ergebnisse B: Klon Gö14-11/13-P
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6. Literaturverzeichnis Yu, Z. and
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Anhang Abb. 7.2: Plasmidkarte und M
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Anhang Abb. 4.8: Exemplarische Dars
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Eidesstattliche Erklärung: Hiermit
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