Identifikation und immunologische Charakterisierung von MHC ...

3. Methoden
Die ligierte DNA wurde ohne weitere Aufarbeitung in den Transformationen
verwendet.
3.2.2.7 Konzentrationsbestimmung von DNA
Die Konzentration von DNA-Lösungen wurde spektralphotometrisch bei 260
nm bestimmt (1 OD260 = 50 µg DNA/ml). Der Quotient OD260/OD280 diente
dabei als Maß für die Reinheit der DNA und betrug im Idealfall 1,8.
3.2.2.8 Abschätzung von DNA-Mengen im Agarosegel
DNA-Mengen wurden im Agarosegel über einen Vergleich der
Fluoreszenzintensität der zu untersuchenden DNA-Bande mit der
Fluoreszenzintensität von DNA-Banden eines quantifizierten DNA-
Größenstandards abgeschätzt. Mit Hilfe eines solchen DNA-Standards
konnten DNA-Mengen bis zu 15 ng im Agarosegel quantifiziert werden.
3.2.3 RNA-analytische Methoden
3.2.3.1 Isolierung von mRNA und Quantifizierung
Die mRNA wurde aus Tumorzelllinien mit Hilfe des RNeasy Mini Kits nach
mitgeliefertem Protokoll für tierische Zellen isoliert. Prinzip dieser Methode ist
die Bindung von mRNA einer Größe von 200 Nukleotiden und mehr an eine
Siliciumdioxid-Membran (Säulenchromatographie). Die DNA wird durch
DNaseI degradiert und mit den anderen Zellbestandteilen abgewaschen; die
RNA schließlich mit Wasser eluiert. Pro Säule können bis zu 100 µg RNA
isoliert werden.
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