Identifikation und immunologische Charakterisierung von MHC ...

4. Ergebnisse
Stimulation Index
9
6
3
0
0 1 2 3 4
DR
3,13
DR
4,14
Abb. 4.8: Exemplarische Darstellung der proliferativen T-Zellantwort auf verschiedene Peptide.
PBMC (2x10 5 /Loch) von gesunden Kontrollprobanden verschiedenen HLA-DR-Typs wurden mit
verschiedenen synthetischen Peptiden in 48 separaten Mikrokulturen (jeweils 2 x 10 5 Zellen) eine
Woche kultiviert. Der proliferative Nachweis mittels [ 3H]-Thymidin-Einbau erfolgte 72 h nach
Restimulation mit den entsprechenden Peptiden. Mikrokulturen mit Peptid, die im Vergleich zu
Kulturen ohne Peptid größer als dreifache Proliferationsraten aufwiesen, wurden als
peptidspezifisch gewertet.
DR
7,15
Für alle Peptide mit Ausnahme des Peptids P166* wurden peptidspezifische
proliferierende Mikrokulturen nachgewiesen. Hieraus ließen sich die
T-Zellfrequenzen der peptidspezifischen T-Lymphozyten unter Berücksichtigung
der eingesetzten Zellzahlen und der Anzahl der proliferierenden Mikrokulturen
ermitteln (Tab. 4.3). Diese waren vergleichbar mit publizierten T-Zellfrequenzen
gegen körpereigene Antigene (Ford and Burger, 1983). Das Peptid P166* war unter
allen getesteten nicht-toxischen Bedingungen unlöslich und konnte daher nicht
für eine in vitro-T-Zellstimulation verwendet werden.
DR
4,7
P58
Die Selektion peptidspezifischer T-Zellen erfolgte mittels „limiting dilution“. Dies
ermöglichte eine Expansion peptid-spezifischer T-Zellklone, die nachfolgend
Stimulation Index
9
6
3
0
0 1 2 3 4
DR
1,15
DR
3,4
DR
7,15
DR
11,13
P239
69