Identifikation und immunologische Charakterisierung von MHC ...

5. Diskussion
ZUSAMMENFASSUNG
Zelluläre Immuntherapien stellen basierend auf gut charakterisierten,
tumorspezifischen Antigenen ein vielversprechendes Konzept in der
Behandlung maligner Erkrankungen dar. Während für viele Tumorantigene
bereits MHC-Klasse-I-Epitope bekannt sind, sind erst wenige Epitope aus
MHC-Klasse-II-abhängigen Tumorantigenen beschrieben. Die spezifische
Antigenerkennung durch CD4+ T-Lymphozyten erfolgt über ein Peptidepitop,
das gebunden an ein MHC-Molekül der Klasse II auf der Oberfläche von
spezialisierten antigenpräsentierenden Zellen oder – seltener – auf der
Tumorzelloberfläche vorliegt. Im Rahmen der vorgestellten Arbeit wurde ein
immunologisches Verfahren etabliert, das eine Identifikation von MHC-
Klasse-II-assoziierten Peptidepitopen in den tumorassoziierten Antigenen
Survivin (SVN) und Proteinase 3 (PR3) ermöglichte. In beiden Tumorproteinen
konnten durch computergestützte Vorhersagen zahlreiche Peptidsequenzen
mit potentieller Bindung an MHC-II-Moleküle identifiziert werden. In Form
von synthetischen Peptiden wurden diejenigen Epitope zur in vitro-
Stimulation von T-Lymphozyten aus peripherem Blut eingesetzt, die mit
hoher Bindungswahrscheinlichkeit an mehrere Allele des wichtigsten Isotyps
(HLA-DR) banden. Gegen alle (löslichen) untersuchten Peptide wurden in der
initialen T-Zellstimulation spezifische Proliferationsreaktionen nachgewiesen.
Von den analysierten Peptiden konnten letztendlich 3 von 6 SVN- sowie 4 von
10 PR3-Peptiden T-Zellklone kultiviert werden. Mit Hilfe dieser Klone ließen
sich die Bindungsaviditäten zwischen MHC-Molekül, Peptidepitop und
T-Zellrezeptor semiquantitativ in Peptidtitrationsversuchen abschätzen.
Zudem zeigten alle TH-Peptidepitope eine HLA-DR-abhängige Präsentation.
In Kokultivierungsversuchen mit rekombinantem Proteinen sowie Lysaten
von SVN bzw. PR3-exprimierenden Tumorzellen wurde für das Peptid S10 eine
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