Identifikation und immunologische Charakterisierung von MHC ...

4. Ergebnisse
Die Titration bzw. Konzentrationsbestimmung der infektiösen Viruspartikel
erfolgte mit Hilfe eines Plaque-Tests und mittels optischer Dichte (OD). Tabelle
4.2 gibt einen Überblick über die Ergebnisse.
Bezeichnung OD260 OD280 OD260/OD280
Titer aus OD
[x10 10 pfu/ml]
Biologischer
Titer [x10 10
pfu/ml]
PR3/LAMP-1 0,267 0,217 1,23 26,7 19,1
GFP 0,119 0,094 1,27 11,9 15,4
Tabelle 4.2: Titer der Viruspräparation
Die Titrationsbestimmung mit der OD erschien zuverlässiger, weil beim
Zeitpunkt der Auszählung der Löcher im Zellrasen der HEK293a-Zellen, diese
schon eine beträchtliche Größe aufwiesen - dies erschwerte die Auswertung.
Ad5/F35-GFP ist der Kontrollvektor in den in vitro Studien. Er ist abgesehen vom
Transgen mit dem anderen Konstrukt identisch. GFP steht für das „Green
Fluorescent Protein".
Der Nachweis der Expression von PR3-Lamp-1 in den entsprechenden Zielzellen
erfolgte 24 h bzw. 48 h nach Transduktion mittels Western Blot. Abb. 4.6 zeigt die
erfolgreiche Transduktion und anschließende Expression von PR3-LAMP-1 in
den Zielzellen HEK 293a und DC von verschiedenen Spendern; Abb. 4.7 die
Expression von GFP in DC mittels Fluoreszenzmikroskopie und
Durchflusszytometrie.
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