ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

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Resultados
2.3. Estudios por ultracentrifugación analítica.
El análisis de la estabilidad de la proteína en disolución y de los parámetros hidrodinámicos se
realizó mediante la técnica de ultracentrifugación analítica. A partir de la secuencia de
aminoácidos de la proteína PsbQ recombinante, se calculó la masa molecular teórica de la misma,
que resultó en 16.65 kDa. El volumen específico parcial calculado teóricamente a partir de la
composición de aminoácidos, resultó en 0.7398 mL/g, siendo la densidad del tampón 1.0040
mg/ml.
A B
Residuales
Ln(A)
Absorbancia
0.5
0.0
-0.5
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
6.0 6.1
Radio (cm)
Figura 25. Experimentos de equilibrio de sedimentación. (A) Representación de la absorbancia a 280
nm de la proteína PsbQ en función de la distancia radial a 15000 g. (B) Representación del Ln(A) a
280 nm en función de la distancia radial. (C) Distribución de la masa molecular aparente en función
de la concentración. Estas representaciones muestran que PsbQ es un monómero en disolución de
masa molecular de 16.65 kDa.
En la Figura 25 se muestran los resultados de los experimentos de equilibrio de
sedimentación de PsbQ en 20 mM Tris-HCl pH 8.0. En esta figura, en el panel (A) se representa
la absorbancia en función de la distancia radial a 20 ºC, fijando la masa molecular en el valor
obtenido teóricamente. Se observa que la proteína PsbQ sedimenta en el equilibrio con un
MWapp
C
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5
-2.0
36.0 36.5 37.0 37.5
50000
40000
30000
20000
10000
r 2 (cm 2 )
0
0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1
Concentración