ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

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Materiales y Métodos
6.5.2. Desnaturalización por agentes térmicos.
A partir de la ecuación [18] y teniendo en cuenta la ecuación de Gibbs-Helmholtz (Becktel &
Schellman, 1987), ecuación [23], los parámetros termodinámicos correspondientes al
desplegamiento térmico, temperatura de desnaturalización (T m) y cambio de entalpía durante el
proceso de desplegamiento (∆HvH), pueden calcularse para un proceso reversible que ocurre en
dos estados según:
( y − y ) / [ 1+
exp(
∆H
( T −T
) / RT T ) ]
y yD
− D N
vH m m
= [20]
siendo y la propiedad espectroscópica medida cuya magnitud varía con T; yN e yD, los valores de
elipticidad o intensidad de emisión de fluorescencia de las formas nativas y desnaturalizadas de
la proteína, respectivamente. Los valores yN e yD mostraron una dependencia lineal con la
temperatura según,
yi = yi
+ mi
⋅T
0
siendo yi 0 y m i los valores del parámetro correspondiente a 0 K para el estado i y su dependencia
con la temperatura, respectivamente. La sustitución de los valores de yN e yD por la ecuación
[21] permite determinar los parámetros termodinámicos T m y ∆HvH por un ajuste por regresión
no lineal por mínimos cuadrados de los datos experimentales a la ecuación [20].
6.5.3. Medidas calorimétricas.
La determinación de la temperatura de desnaturalización, Tm, y la entalpía calorimétrica, ∆Hcal,
se realizó analizando los termogramas con el programa Origin 5.0 (Microcal Inc.). Considerando
una transición en dos estados, la entalpía de van't Hoff a la Tm, ∆HvH, se calcula a partir de la
[21]
curva de transición calorimétrica según la ecuación (Privalov, 1979):
2
∆ H ( T ) = 4RT
Cp(
T ) ∆H
( T ) [22]
vH
m
m
siendo C p(T m) el exceso de capacidad calorífica molar a la Tm. La relación ∆Hcal/∆HvH, es una
medida del grado en el que la unidad cooperativa de desplegamiento experimenta una transición
m
cal
m