ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

4.3.2. Experimentos de atenuación de la fluorescencia.
Resultados
El estudio de la atenuación de la fluorescencia por colisión mediante el uso de agentes acuosos,
como son la acrilamida, el yoduro (I - ) y cesio (Cs + ), es muy utilizado como medida del grado de
exposición de las cadenas laterales de los residuos de triptófano en las proteínas al ambiente
acuoso (Eftink, 1991). Se ha comprobado que la eficiencia de la atenuación de la fluorescencia del
anillo indol por la acrilamida y el yoduro es la unidad mientras que este poder atenuador en el
caso del Cs + es cinco veces menor (Eftink & Ghiron, 1981). La naturaleza cargada de los iones Cs +
y I - hace que puedan colisionar tanto con residuos de triptófano que se encuentren expuestos al
disolvente como con aquellos que se sitúen en un ambiente de potencial electrostático negativo o
positivo, respectivamente. El elemento neutro acrilamida, en cambio, puede acceder al interior
de la proteína y, por tanto, atenuar la fluorescencia no sólo de aquellos residuos de triptófano
que se encuentran expuestos al disolvente sino también de aquellos localizados en un ambiente
menos polar. En la Figura 40 se muestran los espectros de emisión de fluorescencia de PsbQ a
diferentes concentraciones de acrilamida, I - y Cs + .
En estos espectros no se observa ningún desplazamiento del máximo al aumentar la
concentración de los agentes atenuadores, lo que indica la ausencia de cualquier proceso de
desnaturalizacion. En la Figura 41 se representa la intensidad relativa de fluorescencia de
PsbQ a 320 nm en función de la concentración de agente atenuador al excitar la proteína a 295
nm.
Los estudios con los agentes iónicos muestran una dependencia lineal de la disminución
de la intensidad de fluorescencia con la concentración. En cambio, en el caso de la acrilamida se
observa una curvatura ascendente al aumentar la concentración de este compuesto, lo que
sugiere cierta contribución, no sólo de atenuación por colisión, sino también de atenuación
estática (Eftink, 1991). Con la ecuación de Stern-Volmer modificada se calcularon las constantes
de atenuación colisional (Ksv) y estática (V) que se presentan en la Tabla XI. Se observa que la
constante de colisión por la acrilamida es mayor que las respectivas constantes de colisión por
los compuestos iónicos y que la constante de colisión del I - es mayor que la del Cs + . Además, se
encontró una dependencia de la constante de colisión por el I - con respecto a la fuerza iónica.
Estos datos sugieren que la cadena lateral del triptófano está parcialmente enterrada en el
interior de la proteína, a través de la cual la acrilamida puede difundir más fácilmente que los
compuestos cargados, pero en un ambiente polar positivo donde el ion Cs + no puede acceder y sí
el ion I - .
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