ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Discusión
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El centro de la banda a 1633 cm -1 en H 2O fue difícil de fijar, como se comprueba en su
desviación estándar (15 % de la señal) y en su amplio ancho de banda (25.6 cm -1 ). Estos
parámetros indican que la amplia banda a 1633 cm -1 no corresponde a una única vibración sino
que consiste en una mezcla de dos o más estructuras que absorben a longitudes de onda
similares. Los análisis por métodos bioinformáticos y por CD indican que el porcentaje de hoja-β
es relativamente bajo (no más de un 7 %). Por tanto, la señal a 1633 cm -1 (un 24 % del área
total) se podría asignar a hojas-β más algún otro tipo de estructura extendida. Un tipo de
conformación que participaría en la clasificación de estructuras extendidas sería la estructura
tipo PPII, ya que se ha comprobado que fragmentos de estructura del tipo PPII pueden dar
bandas en la zona de vibración de estructuras β extendidas (Malin et al, 2001). Con estas
asignaciones, se podría concluir que el análisis por FTIR de PsbQ corresponde a un 53 % a α-
hélice, un 24 % a hoja-β más otro tipo de estructuras extendidas (entre las que podría estar la
PPII), un 14 % a estructura no regular y un 7 % a giros.
Estos resultados no coinciden con los descritos previamente (Zhang et al, 1999). En el
trabajo de estos autores, la banda a 1645 cm -1 tiene un área relativa de un 31 %, muy diferente
del 14 % que nosotros observamos a 1643.5 cm -1 en D 2O. Otra discrepancia es que ellos asignan
la conformación de hoja-β a toda la banda a 1632 cm -1 en D 2O, un 28 % del área. En su estudio,
no se recogió ningún espectro en H 2O por lo que no pudieron analizar las diferencias entre
ambos disolventes como nosotros hemos discutido.
La presencia de un único triptófano en la secuencia de PsbQ permitió el análisis de su
entorno por la técnica de espectroscopía de emisión de fluorescencia. La clasificación de
Burnstein et al (Burstein et al, 1973), considerando la posición del máximo del espectro de
emisión fluorescencia de PsbQ a 327 nm y el ancho de banda a la mitad del máximo de 53 nm
(Figura 39), sugiere que el residuo de triptófano correspondería al tipo-I. Este grupo lo forman
aquellos residuos triptófano que se localizan en el interior de la proteína pero se encuentran
rodeados de un ambiente hidrofílico. En la clasificación de Vivian et al (Vivian & Callis, 2001), los
parámetros espectroscópicos corresponden a la clase-2, formado por los residuos triptófano
que tienen una arista del anillo bencénico expuesto al disolvente. Por tanto, con estas dos
clasificaciones se propone que el residuo de triptófano está parcialmente expuesto al
disolvente, siendo consistente esta conclusión con los resultados obtenidos en la atenuación de
la emisión de fluorescencia. El hecho de que la constante K SV del I - (1.2 M -1 ) sea menor que la
correspondiente a la acrilamida (3.2 M -1 ) indica que el agente negativo tiene poca accesibilidad al
residuo triptófano en su estado excitado. Además, la falta de atenuación de fluorescencia por
parte del Cs + y la disminución de K SV del I - al aumentar la fuerza iónica, sugieren que no sólo el