ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Discusión
pK a han cambiado, por ejemplo, como consecuencia de su participación en un puente salino fuerte
con otro residuo del PSII en un medio con una constante dieléctrica baja (Yang & Honig, 1993).
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El hecho de que el parámetro T m varíe con el pH del medio en el que se encuentra la
muestra refleja que hay un cambio de protonación en la proteína durante el proceso de
desnaturalización. El valor de ∆ν se ha comprobado que es prácticamente 0 entre los valores 5-
8, pero se desvía ligeramente de este valor entre pH 2-4 (Tabla XXI). Los únicos grupos
carboxilato que pueden ser titulados entre pH 2-4 son los de los residuos de aspártico,
glutámico y del carbono α del extremo C-terminal. Se ha comprobado que los valores de pK a de
estos residuos pueden diferir, en más de dos unidades, entre el estado nativo y el
desnaturalizado como consecuencia, posiblemente, de que un grupo ácido, por ejemplo, por estar
involucrado en un puente salino (Cooper, 1999; Yang & Honig, 1993). En la estructura 3D de PsbQ
se encuentra un puente salino muy fuerte, entre los residuos Lys63 y Asp67, que podría explicar
este valor de ∆ν casi próximo a la unidad medido a pH 2.0. Además, a bajo pH, donde la proteína
tendrá una carga positiva alta, es posible que los pK a de los grupos ácidos en el estado nativo
sean menores que en el estado desnaturalizado, por lo que consecuentemente la proteína
desnaturalizada unirá los protones de manera más eficaz que el estado nativo (Yang et al, 1993).
La variación del parámetro T m con el pH permite estimar la variación de la capacidad
calorífica entre los estados nativo y desnaturalizado relacionando el valor de la T m con ∆H cal (o
∆H vH, considerando un proceso de dos estados). El valor obtenido es de 1.2 cal/mol/K que se
encuentra dentro de los valores observados en diversas proteínas.
El parámetro ∆G H 2 O es una medida de la estabilidad conformacional de la proteína, de
manera que cuanto mayor es este valor más estable es una proteína. La estabilidad
conformacional obtenida para PsbQ en los estudios de desnaturalización por GdnHCl y por
temperatura a 20 ºC y pH 8.0 es de 4 ± 1 Kcal/mol y 4.4 ± 0.8 Kcal/mol, respectivamente. Estos
valores, teniendo en cuenta la diferente naturaleza de las técnicas y de las propiedades
medidas, concuerdan y se incluyen dentro de los valores observados para la estabilidad
conformacional de casi todas las proteínas conocidas, que se encuentra entre 5 y 15 Kcal/mol
(Pace, 1990). La coincidencia de los valores de ∆G (20ºC) y de las curvas de desnaturalización
inducidas químicamente y por temperatura obtenidas por CD a la misma temperatura de 90 ºC,
permiten concluir que estructural y energéticamente los dos estados desnaturalizados son
equivalentes; sin embargo, no se puede concluir sobre el grado de desplegamiento en el que está
el estado desnaturalizado, puesto que cada vez es más evidente que las proteínas no se
despliegan totalmente a altas concentraciones de GdnHCl o temperatura. Se ha encontrado que