ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Discusión
que la segunda rama podría haber dado lugar al OEC de algas verdes y, posteriormente, al de
plantas superiores. La habilidad de cianobacterias y algas no verdes de sintetizar pigmentos de
ficobilina permite establecer una relación estrecha entre ambos grupos de organismos. En el
caso de las oxi-fotobacterias verdes, la síntesis de compuestos derivados de clorofila a y b
permite relacionarlas con plantas verdes (plantas superiores y algas verdes).
Es bien sabido, a partir de análisis evolutivos moleculares de las rutas biosintéticas de
las clorofilas, que el fotosistema más antiguo conocido es el anoxigénico de bacterias rojas y
que el aparato fotosintético en cianobacterias y las relacionadas a éstas han sido las más
recientes en aparecer (Blankenship & Hartman, 1998). Este estudio revela que, aunque exista una
analogía estructural entre los RC de bacterias rojas y del PSII, no hay ninguna similitud en el
lado donador. La aparición del OEC en los organismos oxi-fotosintéticos podría explicarse como
una barrera física para evitar que citocromos, como el c 2 en bacterias rojas, pudieran reducir
directamente al par especial y que, en tal caso, la reacción de oxidación del agua a través de la
Y Z, fuera competitiva.
2. Estudio estructural de PsbQ
Para el estudio estructural y de la estabilidad conformacional de la proteína PsbQ de plantas
superiores se ha escogido como sistema modelo la proteína PsbQ de Spinacia oleracea.
El primer objetivo en este apartado se centró en la optimización de la estrategia de
obtención de la proteína PsbQ pura. Aunque se han propuesto varios métodos de aislamiento y
purificación para esta proteína, estos resultaron ineficaces bien por la activación de una prolil-
endopeptidasa durante el proceso de purificación que resultaba en la degradación de la proteína
PsbQ (Kuwabara & Murata, 1983) o bien por ser métodos agresivos que dañarían al OEC
(Yamamoto & Kubota, 1987). Nosotros hemos propuesto un método que a partir de
concentraciones (sub)milimolares de Cu 2+ consiguió, por una parte, inhibir la actividad de la
proteína endopeptidasa y, por otra parte, despegar de las partículas del PSII casi
específicamente la proteína extrínseca de interés no degradada. Nuestro estudio revela que en
una relación Cu 2+ /PSII ~ 900, la proteína PsbQ de Spinacia oleracea se despega de la membrana
casi específicamente, en concordancia con resultados obtenidos previamente (Arellano, 1994;
Jegerschold et al, 1995), aunque otros estudios han propuesto que concentraciones menores de
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