ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Agente atenuador Fuerza iónica KSV (M -1 ) V (M -1 )
0.2 M
Acrilamida
3.4 ± 0.4 0.10 ± 0.09
1.0 M 3.2 ± 0.1 0.11 ± 0.07
I -
Cs +
F 0 /F
5. Cristalografía por difracción de rayos-X
0.2 M 1.2 ± 0.1 0
1.0 M 0.67 ± 0.04 0
0.2 M 0 0
1.0 M 0 0
5.1. Obtención de cristales de PsbQ y recogida de datos
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20
[Q] (M)
Resultados
Figura 41. Diagrama de Stern-Volmer de la atenuación de la fluorescencia de PsbQ por acrilamida ()
yoduro (● 0.2 M NaCl, ○ 1.0 M NaCl) y cesio (■). Los valores determinados de las constantes Ksv y V se
incluyen en la Tabla XI.
Tabla XI. Valores obtenidos para las constantes dinámicas (Ksv) y estáticas
(V) en los experimentos de atenuación de fluorescencia para los diferentes
agentes químicos, según la ecuación de Stern-Volmer. Los experimentos se
realizaron a dos fuerzas iónicas diferentes (0.2 y 1 M), afectando este
parámetro únicamente a los experimentos realizados con I - .
Los primeros cristales aparecieron a los 2 días, tanto a 4ºC como a 20ºC, con la condición
número 45 de "Crystal Screen I", formada por 0.2 M acetato de Zn (II) dihidrato, 0.1 M de
cacodilato sódico pH 6.5 y 18 % p/V polietilen glicol (PEG) 8000. Para optimizar los cristales se
realizó un muestreo variando el pH (4-9), el precipitante (16-22 % p/V PEG 8000) y la
concentración de Zn 2+ (0-0.3 M). Tras comprobar que el Zn 2+ era necesario para la cristalización
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