ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Tris-HCl 120 mM, pH 6.8
SDS 0.1% p/V
Persulfato amónico 0.05% p/V
TEMED 0.007% p/V
Tampón de desarrollo-
Tris 25 mM
Glicina 150 mM
SDS 0.1 % p/V
Tampón de solubilización-
Tris-HCl 62.5 mM, pH 6.8
SDS 2% p/V
Ditiotreitol 5% p/V
Glicerol 10% p/V
Azul de bromofenol 0.015% p/V
Materiales y Métodos
Las muestras se incubaron con el tampón de solubilización durante 10 min a 90ºC. La
intensidad de corriente constante fue de 20 mA durante aproximadamente 1 hora a
temperatura ambiente. La tinción de los geles se realizó con Azul-Coomassie R-250 al 0.5%
(p/V), a temperatura ambiente, en acético:isopropanol:H 2O (1:3:6) durante 20 min. La
decoloración se realizó con una disolución metanol:acético:H 2O (2:1:10).
2.4. Cuantificación de la concentración de proteína.
La concentración de proteína PsbQ se determinó espectrofotométricamente (Cary 100 UV-
visible -Varian) en una disolución de la proteína que contenía 6M GdnHCl. El coeficiente de
extinción molar de PsbQ en estas condiciones se calculó a partir de la suma de los coeficientes
de absorción molar de sus aminoácidos aromáticos (Gill & von Hippel, 1989), obteniéndose un valor
de 14100 M -1 cm -1 a 276 nm.
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