ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Resultados
demuestra que el espectro de emisión de fluorescencia de la proteína nativa y recombinante,
tanto en condiciones desnaturalizantes como en no desnaturalizantes, son indistinguibles.
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Los residuos de triptófano y tirosina se pueden excitar conjuntamente si la longitud de
onda escogida es de 280 nm. Con esta longitud de onda de excitación, el máximo de emisión se
sitúa en 323 nm, a 20 ºC (Figura 39). Con la normalización a 400 nm y la posterior sustracción
de los espectros obtenidos al excitar a λexc = 280 nm y λexc = 295 nm, se obtiene el espectro de
emisión de los residuos de tirosina que muestra un máximo de emisión a 304 nm, que no suele
depender del entorno molecular (Pearce & Hawrot, 1990). La emisión de la fluorescencia es débil
lo que sugiere que hay una transferencia de energía singlete-singlete eficiente desde el residuo
de tirosina (pudiendo pasar por otra tirosina) hasta el triptófano. La fluorescencia observada a
esta longitud de onda corresponde a la emisión de residuos de tirosina en PsbQ que no
transfieren su energía de excitación debido o bien a una gran distancia Tyr-Trp o a una
orientación del dipolo de transición de emisión y absorción Tyr-Trp ineficiente.
Intensidad (U.A.)
300 350 400
λ (nm)
450
Figura 39. Espectro de emisión de fluorescencia intrínseca, al excitar a 295 nm, de PsbQ nativa (línea
negra continua) y recombinante (línea azul discontinua) en 20 mM Tris-HCl pH 8.0 y 6.0 M GdnHCl (línea
negra discontinua); se muestra además el espectro al excitar a 280 nm (línea roja) en 20 mM Tris-HCl pH
8.0 y la diferencia entre el espectro de emisión de fluorescencia al excitar a 280 y 295 nm (línea verde) al
normalizar a 400 nm.