ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Materiales y Métodos
en dos estados. Por tanto, un valor próximo a la unidad indica la validez del modelo asumido de
transición de dos estados para la proteína monomérica (Privalov, 1979) (Sturtevant, 1987). Una
relación mayor a la unidad implica la presencia de intermedios de desplegamiento, mientras que
una relación menor de la unidad indica que podrían haber interacciones intermoleculares, como
cambios en el estado de oligomerización.
La curva de estabilidad de una proteína que se despliega en un proceso de dos estados -
siendo este proceso reversible, estable durante el cambio de temperatura y experimentado un
cambio de capacidad calorífica constante y mayor de cero- se obtiene a partir de la ecuación de
Gibss-Helmholtz (Becktel & Schellman, 1987):
[ T −T
T ln( T / T ) ]
∆ [23]
G ( T ) = ∆H
vH ( 1−
T / Tm
) −∆CP
m +
m
siendo ∆G la energía libre de Gibbs asociada al proceso de desnaturalización a una determinada
temperatura T, ∆HvH es el cambio de entalpía entre los dos estados a la temperatura de
desnaturalización (Tm), y ∆Cp es el cambio de capacidad calorífica entre los dos estados a
presión constante. La pendiente de dicha representación a la temperatura T m es el cambio de
entropía del proceso (-∆S m). Aunque en teoría el valor de ∆Cp se podría obtener de los
termogramas, experimentalmente el procedimiento recomendado es a partir de la variación de
∆Hcal con Tm a diferentes valores de pH (Privalov, 1979), según la ecuación:
d∆H
dT
cal = ∆C
p
m
El cálculo de la diferencia entre el número de protones del estado desnaturalizado (D) y
el estado nativo (N) debido al proceso de desnaturalización, ∆ν, se obtuvo según la ecuación
(Becktel & Schellman, 1987):
∆
=
ln10RT
dT
⋅
dpH
∆
H
2
m
m
[24]
ν [25]
siendo ∆H la entalpía asociada al proceso de desnaturalización; R, la constante de los gases; T m
la temperatura en el punto medio de la transición.
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