ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

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Resultados se ensayaron las mismas condiciones anteriores (Crystal Screen I y II) y se probaron nuevas condiciones (kits Index y Detergentes, Hampton Research) añadiendo este catión como aditivo. Los cristales, en presencia de 0.3 M de Zn 2+ , crecieron en condiciones diversas de precipitante y tampón entre las que destacamos las recogidas en la Tabla XII. 112 Tabla XII.Diferentes condiciones, probadas a partir de los kits comerciales de Hampton Rearch (I=Crystal Screen I; II= Crystal Screen II; Index), óptimas para la obtención de cristales de <strong>PsbQ</strong> añadiendo 0.3 M de Zn 2+ como aditivo. a Hace referencia al número de condición del kit comercial. Condición a Sal Tampón Precipitante 3, I - - 0.4 M fosfato de 4, I 2-6, Ix 10, I 0.2 M acetato de amonio dihidrógeno - (0.1M) pH 4.5-8.5 2 M sulfato de amonio amonio 15, I 0.2 M sulfato de amonio 45, I 0.2 M acetato de cinc dihidrato 0.1 M acetato de sodio trihidrato pH 4.6 0.1 M cacodilato de sodio pH 6.5 0.1 M cacodilato de sodio pH 6.5 30 % (p/V) PEG4000 30 % (p/V) PEG8000 18 % (p/V) PEG8000 48, I - 0.1 M Tris-HCl pH 8.5 2 M fosfato de amonio dihidrógeno 20, II - 0.1 M Mes pH 6.5 1.6 M sulfato de 26, II 0.2 M sulfato de amonio 32, II 0.1 M cloruro de sodio 42, II 1.5 M sulfato de amonio magnesio heptahidratado 0.1 M Mes pH 6.5 30 % (p/V) PEG- monometiléter 5000 0.1 M HEPES pH 7.5 1.6 M sulfato de amonio 0.1 M Tris pH 8.5 12 % (V/V) glicerol anhidro 24, Ix - - 2.8 M acetato de sodio trihidrato pH 7.0 Se escogieron los cristales obtenidos en 0.3 M acetato de Zn (II), 0.1 M Mes pH 6.5, 16-18 % p/V PEG 6000 (Figura 42), de tipo cúbico, que alcanzaron un tamaño de 0.4 x 0.4 x 0.3
Resultados mm y tenían además buenas características físicas como claridad óptica, caras lisas y aristas marcadas, además de desviar fuertemente el plano de luz polarizada. Figura 42. Fotografías de cristales de <strong>PsbQ</strong> obtenidos en 0.3 M acetato de Zn (II), 0.1 M Mes pH 6.5, 16-18 % p/V PEG 6000, a una concentración de 20 mg/ml de proteína. Estos cristales, con buenas características físicas, fueron susceptibles para la difracción de rayos-X. Estos cristales se trataron con la disolución crioprotectora adecuada y se montaron en el difractómetro del Instituto de Química-Física "Rocasolano" y el análisis lo realizó el Dr. J.A. Hermoso. Los resultados fueron enseguida muy satisfactorios, obteniéndose buenos patrones de difracción, Figura 43, a una resolución aproximada de 1.5 Å. Tras procesar los datos 113
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Apéndice, F . Alineamiento de secu
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