ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Resultados
reversibilidad es ≥ 80 % (Figura 60B). Se repitió, además, un segundo termograma sobre una
muestra que se enfrió rápidamente tras ser calentada hasta 65 ºC a 20 ºC/h, y se alcanzó una
reversibilidad del 100 % (Figura 60C). Esto indica que la irreversibilidad asociada a la
desnaturalización térmica pueda ser debida a procesos que ocurren a altas temperaturas, que no
afecta a las conclusiones obtenidas sobre la transición entre dos estados en equilibro químico en
este trabajo. No se observó dependencia de los parámetros termodinámicos al variar la
concentración de proteína o la velocidad de barrido, lo que sugiere que al calentar la muestra no
ocurre ningún proceso de oligomerización. Los datos calorimétricos se analizaron con el modelo
de dos estados de acuerdo a la ecuación [22], obteniéndose un valor de ∆Hcal = 61.3 ± 0.8
kcal/mol y una Tm = 64.8 ± 0.1 ºC. El ∆HvH obtenido fue de 71.6 ± 1.1 kcal/mol y, por tanto, la
relación ∆Hcal/∆HvH es 0.85.
Cp (kcal/mol/ o Cp (kcal/mol/ C)
o C)
132
A B C
5000
4000
3000
2000 2000
1000
0
-1000
20 30 40 50 60 70 80 90
T (ºC)
Cp (cal/ºC)
-0.0002
-0.0004
-0.0006
-0.0008
-0.0010
-0.0012
30 40 50 60 70 80
30 40 50 60 70 80
T (ºC)
Figura 60.Termogramas de PsbQ obtenidos por DSC a 20ºC/h. (A) La transición muestra un único pico
simétrico para PsbQ en 20 mM Tris-HCl pH 8.0. (B) Estudio de la reversibilidad del proceso que muestra que
altas temperaturas pueden ocurrir procesos de agregación (color negro, primer barrido; color azul, segundo
barrido sobre la misma muetra). (C) La muestra se calentó a 20ºC/h hasta 65 ºC (azul), se enfrióy se repitió
un segundo termograma. La reversibilidad en este último caso es próxima a un 100 %.
En la Figura 61 se recoge la superposición de la fracción desnaturalizada de PsbQ en 20
mM Tris-HCl pH 8.0 en función de la temperatura según las diferentes técnicas empleadas: CD
lejano (220 nm), CD cercano (291 nm), UV (320 nm) y DSC. La superposición es indicativa de que
T (ºC)
con cierta fiabilidad el proceso de desnaturalización térmica ocurre en dos estados.