ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

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96 Resultados de la segunda derivada (Figura 32B y C), las bandas de amida I y I´ se resuelven en cinco (1687, 1677, 1656, 1633, 1616 cm -1 ) y seis (1681, 1671, 1654, 1643, 1632 y 1615 cm -1 ) componentes respectivamente, que corresponderían a las diferentes entidades conformacionales. En la Tabla VIII se muestra la cuantificación del área de cada una de las bandas gaussianas que se estima que componen el espectro original. Absorbancia 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 1700 1687 1677 1680 1656 1660 1640 1633 1633 nº de onda (cm -1 nº de onda (cm ) -1 ) 1615 1615 1620 1600 Absorbancia Figura 32. Descomposición de la banda de amida I (izquierda) e I' (derecha) de los espectros de absorción de IR de <strong>PsbQ</strong>. (A) Espectro original (línea continua, negro), espectro reconstruido (línea discontinua, azul) y las principales bandas Gaussinas que componen el espectro: 5 bandas en H2O y 6 bandas en D2O. (B) Deconvolución de los espectros originales, donde se indican la posición del máximo de cada banda. (C) Segunda derivada (-δ 2 A/δυ 2 ) de los espectros originales. Se observó una correspondencia notable entre las bandas de los datos adquiridos en H 2O y D 2O según el desplazamiento isotópico esperado cuando las medidas se realizan en D 2O. Este desplazamiento es mayor a medida que mayor es el número de onda. Las bandas a 1687 cm -1 y 1677 cm -1 en H 20 se corresponden con las bandas a 1681 cm -1 y 1671 cm -1 en D 2O, y así ocurre con las bandas a 1656 cm -1 con 1654 cm -1 y 1643 cm -1 , 1633 cm -1 con 1632 cm -1 , y 1616 cm -1 con 1615 cm -1 . En el espectro en H 2O hay una señal muy intensa a 1656.2 cm –1 (67 % del área total), 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 1700 1681 1671 1680 1654 1660 1643 1640 1632 nº de onda (cm -1 nº de onda (cm ) -1 ) 1615 1620 1600
Resultados que corresponde al solapamiento de la señal de α-hélice y estructuras abiertas extendidas como son los lazos y las estructuras no regulares. Además, la banda amida I muestra señales de menor intensidad: a 1633.1 cm -1 (24 % del área total), que se asigna habitualmente a las vibraciones intramoleculares del grupo carbonilo de estructuras lámina-β; a 1615.7 cm -1 (1.4 % del área total), que representa interacción entre cadenas laterales; y, 1677.3 y 1687.2 cm -1 (7.5 % del área total), que se asignan a giros y a vibraciones de estructura β. Tabla VIII. Valores correspondientes a la posición de la banda y el porcentaje de área obtenidos tras el análisis y descomposición de la banda amida I y I', a 21 ºC. Los datos corresponden a la media de seis muestras diferentes ± la desviación estándar en H2O y a la media de cuatro muestras diferentes ± la desviación estándar en D2O. posición (cm -1 ) H 2O D 2O área (%) posición (cm -1 ) área (%) 1687.2 ± 1.1 2.74 ± 0.36 1681.1 ± 0.3 1.08 ± 0.47 1677.3 ± 0.5 4.75 ± 0.73 1670.9 ± 0.2 6.81 ± 0.37 1656.2 ± 0.4 67.57 ± 2.67 1654.1 ± 0.3 38.32 ± 0.89 1643.5 ± 0.4 14.40 ± 1.34 1633.1 ± 1.2 23.72 ± 3.79 1632.1 ± 0.6 34.66 ± 1.39 1615.7 ± 0.8 1.38 ± 0.54 1615.3 ± 0.6 3.93 ± 1.98 En D 2O, se puede resolver el solapamiento entre bandas que ocurría en H 2O. La banda a 1656.2 cm -1 en H 2O se desdobla en dos en D 2O, una a 1654.1 cm -1 (38.3 % del área total), correspondiente inequívocamente a estructura α-hélice y otra banda a 1644.5 cm -1 (14.4 % del área total), que se asigna a estructura abierta extendida. Como se comprueba, la suma de las áreas de las dos bandas en D 20 a 1654.1 y 1644.5 cm -1 no se corresponde con el área de la banda original en H 20 a 1656.2 cm -1 (véase discusión). La banda a 1632.1 cm -1 (34.7 % del área total en D 20) se relaciona habitualmente con estructuras β o cadenas extendidas y se observa un aumento en su área con respecto a H 2O. Las bandas a 1681.1 y 1670.9 cm -1 (8 % del área total) se asignan a giros, normalmente a giros β. Estas bandas se corresponderían con las bandas a 1689.8 y 1677.9 cm -1 en H 2O. La señal a 1615.3 cm -1 se debe a la contribución de cadenas laterales (Arrondo et al, 1993). La asignación de las bandas a las diferentes entidades conformacionales se comentará en el apartado de Discusión. 97
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