ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

Resultados
tirosinas al disolvente (α) de 0.76. Por tanto, en condiciones nativas, 1 ó 2 tirosinas de la
estructura de PsbQ de espinaca no están expuestas al disolvente.
A B
Absorbancia
0.2
0.1
0.0
250 260 270 280 290 300 310 320
λ (nm)
4.3. Análisis por emisión de fluorescencia.
4.3.1. Espectros de emisión de fluorescencia.
-0.2
260 270 280 290 300 310
La secuencia de PsbQ de espinaca contiene un único residuo de triptófano totalmente
conservado en la familia de la proteína. Este residuo puede ser excitado específicamente usando
una longitud de onda mayor a 295 nm (Lakowicz, 1999), estando su espectro de emisión altamente
influenciado por el entorno molecular de su cadena lateral. En la Figura 39 se muestra el
espectro de emisión de fluorescencia de la proteína PsbQ, al ser excitada a 295nm, en el que se
observa un máximo de intensidad a 327 nm con un ancho de banda espectral a la mitad del
máximo de 53 nm, a 20 ºC. Este espectro es diferente al obtenido cuando la proteína se
encuentra en condiciones desnaturalizantes, 6.0 M GdnHCl, en el cual se observa un
desplazamiento del máximo a 353 nm y una disminución de la intensidad de fluorescencia. Esto
sugiere que el entorno molecular del triptófano es más polar (está más expuesto al disolvente)
en condiciones desnaturalizantes que en condiciones nativas. En esta figura también se
Absorbancia
0.4
0.2
0.0
a
λ (nm)
Figura 38. (A) Superposición del espectro de absorción de la proteína PsbQ nativa y recombinante. (B)
Espectro de absorción y segunda derivada del espectro (δ 2 A/δλ 2 ) de PsbQ en 20 mM Tris-HCl pH 8.0 (línea
continua) y en 6.0 M GdnHCl (línea punteada). Las flechas indican las distancia entre el máximo y el mínimo
de los picos cuyo valor permite calcular la relación a/b.
b
107