ANÁLISIS ESTRUCTURAL DE LA PROTEÍNA EXTRÍNSECA PsbQ ...

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Materiales y Métodos
concentración de 1.1 mg/mL en 20 mM Tris-HCl pH 8.0. La distribución radial de la proteína se
midió por absorción a 280 nm cada 10 min. Los coeficientes de sedimentación y de difusión se
analizaron usando el método implementado en el programa SEDFIT (Schuck, 2000), que ajusta
los datos experimentales a la ecuación de Lamm [4]. Esta ecuación representa el cambio en los
perfiles de concentración, en función del radio y del tiempo, de una partícula en una celda de
forma de sector (Figura 13) sometida a un campo de fuerzas centrífugo ω 2 r. En su forma
diferencial se expresa como (Lamm, 1929):
dC 2
dt
1 d ⎡ dC 2 ⎤
= ⋅
⎢
rD − s r C
r dr ⎣ dr ⎥
⎦
ω [4]
siendo C, la concentración a la distancia r (del centro de rotación al punto medio del límite de
concentración) en el tiempo t; ω, la velocidad de rotación; s, el coeficiente de sedimentación; y,
D, el coeficiente de difusión.
El cálculo de la masa molecular a partir de los datos experimentales obtenidos se realizó
según la ecuación de Svedverg,
sRT
=
D(
1−υ
ρ)
M [5]
siendo R, la constante de los gases; υ , el volumen específico parcial; s, el coeficiente de
sedimentación; D, el coeficiente de difusión; y, ρ, la densidad de la disolución.
Los valores experimentales de s se transformaron según la ecuación [6] para obtener
los correspondientes valores de s20,w (Lebowitz et al, 2002).
s
( 1−υ
ρ)
η
20,
w T , b
20,
w = s ⋅
[6]
( 1−υ
ρ)
T , bη20,
w
siendo s20,w el valor de s en condiciones estándar, 20 ºC en agua; s, el coeficiente de
sedimentación experimental; υ , el volumen específico parcial; ρ, la densidad de la disolución; y,
η, la viscosidad de la disolución. Los subíndices T y 20, son la temperatura experimental de
medida y la de referencia, respectivamente; b y w, hacen referencia al tampón y al agua,