(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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항체 Ab1에 대한 ID50은 0.1 ㎎/㎏이고, 그리고 0.3 ㎎/㎏에서 A2M 반응이 완전히 억제되었다. 이는 인간 IL-
6의 생체내 중화가 항체 Ab1에 의해 달성될 수 있다는 것을 명백하게 증명한다.
실시예 10 RXF393 악액질 모형 연구 1.
도입
인간 신장 세포 암 세포주, RXF393은 무흉선 누드 생쥐 내로 이식될 때, 현저한 체중 감소를 유발한다. 체중 감
소는 이식후 대략 15일 시점에 시작되고, 그리고 80%의 동물이 이식후 18 - 20일 시점에 전체 체중의 적어도
30%를 상실한다. RXF393은 인간 IL-6을 분비하고, 그리고 이들 동물에서 인간 IL-6의 혈장 농도는 대략 10 ng/
㎖에서 매우 높다. 인간 IL-6은 뮤린 가용성 IL-6 수용체에 결합하고 생쥐 내에서 IL-6 반응을 활성화시킨다.
인간 IL-6은 생쥐에서 IL-6 반응을 활성화시키는데 있어서 뮤린 IL-6보다 대략 10배 덜 강력하다. 본 연구의 목
적은 인간 신장 세포 암 세포주, RXF393으로 이식된 무흉선 누드 생쥐 내에서 생존, 체중, 혈청 아밀로이드 A
단백질, 혈액 파라미터, 그리고 종양 성장에 대한 항체 Ab1의 효과를 결정하는 것이었다.
방법
80마리, 6주령, 수컷 무흉선 누드 생쥐는 오른쪽 옆구리에서 RXF393 종양 단편(30-40 ㎎)이 피하 이식되었다.
동물은 이후, 10마리 생쥐의 8개 군으로 분할되었다. 3마리 군은 이식후 1일, 8일, 15일과 22일자에 주1회씩 3
㎎/㎏, 10 ㎎/㎏, 또는 30 ㎎/㎏의 항체 Ab1이 정맥내 투약되었다(진행 군). 다른 3마리 군은 이식후 8일, 15일
과 22일자에 주1회씩 3 ㎎/㎏, 또는 10 ㎎/㎏, 또는 30 ㎎/㎏의 항체 Ab1이 정맥내 투약되었다(역행 군). 최종
적으로, 하나의 대조 군은 다중클론 인간 IgG 30 ㎎/㎏이, 그리고 두 번째 대조 군은 인산염 완충된 염수가 이
식후 1일, 8일, 15일과 22일자에 주1회씩 정맥내 제공되었다.
동물은 28일자에, 종양이 4,000 mm 3
에 도달할 때, 또는 그들이 쇠약해지면(체중의 >30% 상실) 안락사되었다. 동
물은 이식후 1일, 6일, 그리고 9일부터 28일까지 매일 칭량되었다. 평균 체중 비율(Mean Percent Body Weight,
MPBW)이 본 연구 동안 체중 감소를 모니터하기 위한 일차 파라미터로서 이용되었다. 이는 아래와 같이 계산되었
다: (체중 - 종양 중량)/기준선 체중 x 100. 종양 중량은 이식후 1, 6, 9, 12, 15, 18, 22, 25와 28일자에 측
정되었다. 혈액은 5일과 13일자에 각 군에서 5마리 생쥐로부터 마취 하에 채취되고, 그리고 안락사될 때(대부분
의 경우에 28일자 시점) 각 군에서 10마리 생쥐 모두에서 채취되었다. 혈액은 혈액학과 혈청 아밀로이드 A 단백
질(SAA) 농도에 대하여 분석되었다. 10마리 비-종양 보유 6주령, 무흉선 누드 수컷 생쥐의 추가 군은 기준선 값
으로 기능하는 혈액학과 SAA 농도 평가를 위하여 혈액 시료가 채취되었다.
결과 - 생존
항체 Ab1 군의 동물은 28일의 연구 종결일 이전에, 안락사되거나 폐사하지 않았다. 2가지 대조 군에서, 15마리
동물(다중클론 인간 IgG 군에서 7/9 및 인산염 완충된 염수 군에서 8/10)이 폐사하거나, 또는 매우 쇠약해져(체
중의 >30% 상실) 안락사되었다. 양쪽 대조 군에서 평균 생존 기간은 20일이었다.
이들 두 대조 군 및 항체 Ab1 진행(본 연구의 1일자부터 투약됨) 군에 대한 생존 곡선은 도 5에 제공된다.
이들 두 대조 군 및 항체 Ab1 역행(본 연구의 8일자부터 투약됨) 군에 대한 생존 곡선은 도 6에 제공된다.
다중클론 인간 IgG(p=0.0038)와 인산염 완충된 염수(p=0.0003) 대조 군에 대한 생존 곡선 및 6가지 항체 Ab1 군
에 대한 생존 곡선 사이에 통계학적으로 유의한 차이가 존재하였다. 두 대조 군 사이에 통계학적으로 유의한 차
이는 존재하지 않았다(p=0.97).
결과 - 종양 크기
공개특허 10-2011-0112308
생존 생쥐에서 종양 크기는 촉진에 의해 평가되었다. 본 연구의 첫 15일 동안, 임의의 군에서 어떤 생쥐도 폐사
하거나 안락사되지 않았고, 따라서 이들 일자에서 군간에 종양 크기의 비교는 샘플링 치우침(sampling bias)이
없었다. 15일자까지 항체 Ab1 진행 군 또는 역행 군 및 대조 군 사이에 종양 크기에서 차이가 관찰되지 않았다.
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