(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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와 배양 단계 이후에 선별된다. 이들 방법은 하나 이상의 분리된, 항원-특이적 세포로부터 선별된 항체 또는 이
의 일부분을 염기서열분석하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 염기서열분석을 위한 당분야에 공지된 임의의 방
법이 이용될 수 있고, 중쇄, 경쇄, 가변 영역(들), 및/또는 상보성 결정 영역(들)(CDR)을 염기서열분석하는 단
계를 포함할 수 있다.
농축 단계에 더하여, 항체 선별을 위한 방법은 또한, 항원 인식 및/또는 항체 기능성에 대하여 세포 집단을 스
크리닝하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 가령, 원하는 항체는 특정한 구조 특징, 예를 들면, 특정 구조
의 특정 에피토프 또는 의태(mimicry)에 결합; 길항제 또는 효능제 활성; 또는 중화 활성, 예를 들면, 항원과
리간드 사이에 결합 저해를 보유할 수 있다. 한 구체예에서, 항체 기능성 스크리닝은 리간드-의존성이다. 항체
기능성에 대한 스크리닝에는 항원 리간드의 재조합 수용체 단백질과의 자연적인 상호작용을 되살리는 시험관내
단백질-단백질 상호작용 분석; 그리고 리간드 의존성이고 용이하게 모니터되는 세포-기초된 반응(가령, 증식반
응)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 한 구체예에서, 항체 선별을 위한 방법은 저해 농도(IC50)를 측정함
으로써 항체 기능성에 대하여 세포 집단을 스크리닝하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 적어도 하나의 분리
된, 항원-특이적 세포는 대략 100, 50, 30, 25, 10 ㎍/㎖ 이하, 또는 그 내에 증분의 IC50을 갖는 항체를 생산
한다.
농축 단계에 더하여, 항체 선별을 위한 방법은 또한, 항체 결합 강도에 대하여 세포 집단을 스크리닝하는 하나
이상의 단계를 포함할 수 있다. 항체 결합 강도는 당분야에 공지된 임의의 방법(가령, Biacore)에 의해 측정
될 수 있다. 한 구체예에서, 적어도 하나의 분리된, 항원-특이적 세포는 높은 항원 친화성, 예를 들면, 대략
5x10 -10
M-1 이하, 바람직하게는 대략 1x10 -13
내지 2x10 -11
, 대략 1.5x10 -11
내지 5x10 -10
, 1x10 -12
내지 1x10 -10
, 1x10 -12
내지 7.5x10 -11
, 1x10 -11
또는 그 이하, 또는 그 내에 증분의 해리 상수(Kd)를 갖는 항체를 생산한다. 이러
한 구체예에서, 항체는 친화성 성숙인 것으로 일컬어진다. 바람직한 구체예에서, 항체의 친화성은 Panorex
(에드레콜로맙), Rituxan
(리툭시맙), Herceptin
(트라즈투주맙), Mylotarg
(젠투주맙), Campath
(알렘투주맙), Zevalin(이브리투모맙), Erbitux(세툭시맙), Avastin(베비시주맙),
Raptiva(에팔리주맙), Remicade
(인플릭시맙), Humira(아달리무맙), 그리고 Xolair(오말리주맙) 중에서 한 가지의 친화성에 필적하거나, 또
는 이보다 높다. 바람직하게는, 항체의 친화성은 Humira의 친화성에 필적하거나, 또는 이보다 높다. 항체의
친화성은 또한, 공지된 친화성 성숙 기술에 의해 증가될 수 있다. 한 구체예에서, 적어도 하나의 세포 집단은
항체 기능성과 항체 결합 강도 중에서 적어도 하나, 바람직하게는 둘 모두에 대하여 스크리닝된다.
농축 단계에 더하여, 항체 선별을 위한 방법은 또한, 항체 서열 상동성, 특히 인간 상동성에 대하여 세포 집단
을 스크리닝하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 적어도 하나의 분리된, 항원-특이적 세포
는 인간 항체에 대하여, 대략 50% 내지 대략 100%, 또는 그 내에 증분, 또는 대략 60%, 70%, 80%, 85%, 90%,
또는 95% 이상의 상동성을 갖는 항체를 생산한다. 이들 항체는 당분야에 공지된 기술, 예를 들면, CDR 이식
(grafting) 또는 선택성 결정 잔기 이식(SDR)에 의해, 인간 서열에 대한 상동성을 증가시키기 위하여 인간화될
수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명에서는 또한, IC50, Kd, 및/또는 상동성의 관점에서 앞서 기술된 임의의 구체예에 따
른 항체 자체를 제시한다.
본 명세서에 기술된 B 세포 선별 프로토콜은 항체-분비 B 세포 및 원하는 표적 항원에 특이적인 단일클론 항체
를 획득하기 위한 다른 방법과 대비하여 다수의 본질적인 이점을 갖는다. 이들 이점에는 아래가 포함되지만 이
들에 국한되지 않는다:
공개특허 10-2011-0112308
첫째, 이들 선별 절차가 원하는 항원, 예를 들면, IL-6 또는 TNF-알파와 함께 이용될 때, 이들 방법은 항체의
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