(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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용이 상기 분자 구조와 에피토프 사이에 복합체를 안정화시킨다. 전형적인 항체 분자는 면역글로불린이고, 그리
고 모든 공급원, 예를 들면, 인간, 설치류, 토끼, 소, 양, 돼지, 개, 기타 포유동물, 닭, 기타 조류 등으로부터
모든 유형의 면역글로불린, IgG, IgM, IgA, IgE, IgD 등은 "항체"인 것으로 간주된다. 본 발명에 따른 출발 물
질로서 유용한 항체를 생산하기 위한 바람직한 공급원은 토끼이다. 다수의 항체 코딩 서열이 보고되었고, 그리
고 다른 것들은 당분야에 널리 공지된 방법에 의해 생산될 수 있다. 이들의 실례에는 키메라 항체, 인간 항체와
다른 비-인간 포유동물 항체, 인간화 항체, 단일 쇄 항체, 예를 들면, scFv, 카멜바디(camelbody), 나노바디
(nanobody), IgNAR(상어로부터 유래된 단일-쇄 항체), 소형-규격 면역약제(small-modular
immunopharmaceutical, SMIP), 그리고 항체 단편, 예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2 등이 포함된다(참조:
Streltsov VA, et al., Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-
developmental isotype, Protein Sci. 2005 Nov;14(11):2901-9. Epub 2005 Sep 30; Greenberg AS, et al., A
new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in
sharks, Nature. 1995 Mar 9;374(6518):168-73; Nuttall SD, et al., Isolation of the new antigen receptor
from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Immunol.
2001 Aug;38(4):313-26; Hamers-Casterman C, et al., Naturally occurring antibodies devoid of light
chains, Nature. 1993 Jun 3;363(6428):446-8; Gill DS, et al., Biopharmaceutical drug discovery using
novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 Dec;17(6):653-8. Epub 2006 Oct 19).
가령, 항체, 또는 이들의 항원 결합 단편 또는 변이체는 유전자 조작으로 생산될 수 있다. 이러한 기술에서, 다
른 방법에서처럼, 항체-생산 세포는 원하는 항원 또는 면역원에 민감해진다. 항체 생산 세포로부터 분리된 메신
저 RNA는 PCR 증폭을 이용하여 cDNA를 만드는 주형으로서 이용된다. 각각 초기 항원 특이성을 유지하는 하나의
중쇄 유전자 및 하나의 경쇄 유전자를 포함하는 벡터의 라이브러리는 증폭된 면역글로불린 cDNA의 적절한 구역
의 이들 발현 벡터 내로의 삽입에 의해 생산된다. 조합 라이브러리(combinatorial library)는 중쇄 유전자 라이
브러리를 경쇄 유전자 라이브러리와 통합함으로써 구축된다. 이는 중쇄와 경쇄를 공동-발현하는 클론의 라이브
러리(항체 분자의 Fab 단편 또는 항원 결합 단편과 유사함)를 산출한다. 이들 유전자를 보유하는 벡터는 숙주
세포 내로 공동-형질감염된다. 항체 유전자 합성이 형질감염된 숙주 내에서 유도될 때, 중쇄와 경쇄 단백질은
자가-조립하여 항원 또는 면역원을 이용한 스크리닝에 의해 검출될 수 있는 활성 항체를 생산한다.
목적되는 항체 코딩 서열에는 본래의 서열에 의해 인코딩된 것들, 그리고 유전자 코드의 축중성(degeneracy)으
로 인하여, 이들 개시된 핵산과 서열에서 동일하지 않는 핵산, 그리고 이들의 변이체가 포함된다. 변이체 폴리
펩티드는 아미노산(aa) 치환, 부가 또는 결실을 보유할 수 있다. 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환, 또는
비-필수 아미노산을 제거하는, 예를 들면, 당화 부위를 변화시키거나, 또는 기능에 필요하지 않은 하나 이상의
시스테인 잔기의 치환 또는 결실로 오접힘을 최소화시키는 치환일 수 있다. 변이체는 단백질의 특정 부위(가령,
기능성 도메인, 촉매성 아미노산 잔기 등)의 생물학적 활성을 유지하거나 강화시키도록 설계될 수 있다. 변이체
는 또한, 본 명세서에 기술된 폴리펩티드의 단편, 특히 생물학적 활성 단편 및/또는 기능성 도메인에 상응하는
단편을 포함한다. 클로닝된 유전자의 시험관내 돌연변이유발을 위한 기술은 공지되어 있다. 또한, 본 발명에는
단백분해성 분해에 대한 내성을 개선하거나, 또는 용해도 특성을 최적화하거나, 또는 이들을 치료제로서 더욱
적합하게 만들기 위하여, 통상적인 분자 생물학적 기술을 이용하여 변형된 폴리펩티드가 포함된다.
키메라 항체는 한쪽 종의 항체 생산 세포로부터 획득된 가변 경쇄와 중쇄 영역(VL과 VH)을 다른 종으로부터 불변
경쇄와 중쇄 영역과 통합함으로써 재조합 수단에 의해 만들어질 수 있다. 전형적으로, 키메라 항체는 주로 인간
도메인을 보유하는 항체를 생산하기 위하여, 설치류 또는 토끼 가변 영역 및 인간 불변 영역을 이용한다. 이런
키메라 항체의 생산은 당분야에 널리 공지되어 있고, 그리고 표준 수단(예로써, 본 발명에 참조로서 편입되는
U.S. 특허 No. 5,624,659에서 기술된 바와 같은)에 의해 달성될 수 있다. 게다가, 본 발명의 키메라 항체의 인
간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgG10, IgG11, IgG12, IgG13,
IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 또는 IgG19 불변 영역에서 선택될 수 있는 것으로 고려된다.
인간화 항체는 더욱 인간-유사한 면역글로불린 도메인을 보유하고, 그리고 동물-유래된 항체의 상보성 결정 영
역만을 통합하도록 조작된다. 이는 단일클론 항체의 가변 영역의 초가변 루프(hyper-variable loop) 서열을 조
심스럽게 조사하고, 그리고 이들을 인간 항체 사슬의 구조에 적합시킴으로써 달성된다. 겉보기에 복잡하지만,
이러한 과정은 실시가 간단하다(참조: 본 발명에 참조로서 편입된 U.S. 특허 No. 6,187,287). 바람직한 구체예
에서, 인간화는 하기에 상세하게 기술된 바와 같이 달성될 수 있다. 이러한 계획은 인간화되는 모 항체에 고도
로 상동성인 인간 FR 상에 CDR을 이식한다.
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공개특허 10-2011-0112308