(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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완전한 면역글로불린(또는 이들의 재조합 대응물)에 더하여, 에피토프 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 단편
(가령, Fab', F(ab')2, 또는 다른 단편)이 합성될 수 있다. "단편", 또는 최소 면역글로불린은 재조합 면역글로
불린 기술을 이용하여 설계될 수 있다. 가령, 본 발명에 이용되는 "Fv" 면역글로불린은 융합된 가변 경쇄 영역
및 가변 중쇄 영역을 합성함으로써 생산될 수 있다. 항체의 조합, 예를 들면, 2개의 상이한 Fv 특이성을 포함하
는 디아바디(diabody) 역시 목적된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, SMIP(소분자 면역약제), 카멜바디, 나노
바디, 그리고 IgNAR이 면역글로불린 단편에 포함된다.
면역글로불린 및 이들의 단편은 예로써, 이펙터 모이어티, 예를 들면, 화학적 링커, 검출가능 모이어티, 예를
들면, 형광 염료, 효소, 독소, 기질, 생물발광 물질, 방사성 물질, 화학발광 모이어티 등을 추가하기 위하여 번
역후 변형될 수 있고, 또는 특이적 결합 모이어티, 예를 들면, 스트렙타비딘, 아비딘, 또는 비오틴 등이 본 발
명의 방법과 조성물에 이용될 수 있다. 추가의 이펙터 분자의 실례는 하기에 제공된다.
용어 "연장된 기간 동안 원하는 분비된 이종성 폴리펩티드를 안정적으로 발현하거나, 또는 발현하는 배수체 효
모"는 역치 발현 수준, 전형적으로 적어도 10-25 ㎎/ℓ, 바람직하게는 실질적으로 그 이상에서 적어도 수일 내
지 1주일, 더욱 바람직하게는 적어도 1개월, 이보다 더욱 바람직하게는 적어도 1-6개월, 그리고 이보다 더욱 바
람직하게는 1년 이상 동안 상기 폴리펩티드를 분비하는 효모 배양액을 지칭한다.
용어 "원하는 양의 재조합 폴리펩티드를 분비하는 배수체 효모 배양액"은 적어도 10-25 ㎎/ℓ의 이종성 폴리펩
티드, 더욱 바람직하게는 적어도 50-500 ㎎/ℓ, 그리고 가장 바람직하게는 500-1000 ㎎/ℓ 또는 그 이상을 안정
적으로, 또는 연장된 기간 동안 분비하는 배양액을 지칭한다.
유전자 코드에 따른 폴리뉴클레오티드 서열의 번역이 폴리펩티드 서열을 생성시키면(즉, 폴리뉴클레오티드 서열
이 폴리펩티드 서열을 "인코딩하면") 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 상기 폴리펩티드 서열에 "상응하고", 그리
고 2개의 폴리뉴클레오티드 서열이 동일한 폴리펩티드 서열을 인코딩하면, 한쪽 폴리뉴클레오티드 서열은 다른
폴리뉴클레오티드 서열에 "상응한다."
DNA 구조체의 "이종성" 영역 또는 도메인은 자연에서 더욱 큰 DNA 분자와 관련하여 관찰되지 않는, 상기 DNA 분
자 내에서 DNA의 확인가능 조각이다. 따라서 이종성 영역이 포유동물 유전자를 인코딩할 때, 상기 유전자는 통
상적으로, 공급원 생물체의 게놈 내에서 포유동물 게놈 DNA에 접하지 않는 DNA가 측면에 위치할 것이다. 이종성
영역의 다른 실례는 코딩 서열 그 자체가 자연에서 관찰되지 않는 구조체(가령, 게놈 코딩 서열이 인트론을 포
함하는 cDNA, 또는 본래의 유전자와 상이한 코돈을 보유하는 합성 서열)이다. 대립유전자 변이 또는 자연-발생
돌연변이 현상은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 DNA의 이종성 영역을 발생시키지 못한다.
"코딩 서열"은 (유전자 코드에 비추어) 단백질 또는 펩티드 서열에 상응하거나, 또는 이러한 서열을 인코딩하는
코돈의 인-프레임 서열이다. 2개의 코딩 서열은 이들 서열 또는 이들의 상보성 서열이 동일한 아미노산 서열을
인코딩하면, 서로에 상응한다. 적절한 조절 서열과 공동으로 코딩 서열은 전사되고 폴리펩티드로 번역될 수 있
다. 폴리아데닐화 신호와 전사 종결 서열은 일반적으로, 코딩 서열에 대해 3'에 위치할 것이다. "프로모터
서열"은 세포 내에서 RNA 중합효소에 결합하고 하류(3' 방향) 코딩 서열의 전사를 개시할 수 있는 DNA 조절 영
역이다. 프로모터 서열은 전형적으로, 코딩 서열의 전사에 영향을 주는 조절 분자(가령, 전사 인자)의 결합을
위한 추가 부위를 포함한다. 코딩 서열은 RNA 중합효소가 세포 내에서 프로모터 서열에 결합하고 상기 코딩 서
열을 mRNA로 전사시킬 때 프로모터 서열의 "제어 하에"있거나, 또는 프로모터에 "작동가능하게 연결되고", mRNA
는 이후, 상기 코딩 서열에 의해 인코딩된 단백질로 번역된다.
공개특허 10-2011-0112308
외래 물질, 예를 들면, DNA, RNA 또는 단백질을 생물체 또는 숙주 세포 내로 도입하기 위하여 벡터가 이용된다.
전형적인 벡터에는 재조합 바이러스(폴리뉴클레오티드의 경우) 및 리포좀 또는 다른 지질 응집체(폴리펩티드 및
/또는 폴리뉴클레오티드의 경우)이 포함된다. "DNA 벡터"는 다른 폴리뉴클레오티드 조각이 부착되고 이러한 부
착된 조각의 복제를 유발할 수 있는 레플리콘, 예를 들면, 플라스미드, 파지 또는 코스미드이다. "발현 벡터"는
적절한 숙주 세포에 의한 폴리펩티드 합성을 주동하는 조절 서열을 포함하는 DNA 벡터이다. 이는 일반적으로,
RNA 중합효소에 결합하고 mRNA의 전사를 개시하는 프로모터, 그리고 mRNA의 폴리펩티드로의 번역을 주동하는 리
보솜 결합 부위와 개시 신호를 의미한다. 적절한 부위에서, 그리고 정확한 해독틀 내에서 발현 벡터 내로 폴리
뉴클레오티드 서열의 통합, 그 이후에 상기 벡터에 의한 적절한 숙주 세포의 형질전환은 상기 폴리뉴클레오티드
서열에 의해 인코딩된 폴리펩티드의 생산을 가능하게 한다. 전형적인 발현 벡터 및 이들의 이용을 위한 기술은
아래의 간행물에서 기술된다: Old et al., Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic
Engineering, Blackwell Scientific Publications, 4th edition, 1989; Sambrook et al., Molecular Cloning:
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