(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

[0495]
[0496]
[0497]
[0498]
[0499]
[0500]
[0501]
[0502]
[0503]
[0504]
[0505]
[0506]
[0507]
[0508]
[0509]
[0510]
d. 단일 B 세포가 항원에 특이적인 항체를 생산하는 지를 결정하는 단계.
다른 구체예에서, 본 발명에서는 단일, 항체-생산 B 세포를 분리하는 방법에 개선을 제시하고, 상기 개선은 면
역화되거나 항원에 자연적으로 노출된 숙주로부터 획득된 B 세포 집단을 농축하는 단계를 포함하고, 여기서 농
축 단계는 임의의 선별 단계를 선행하고, 적어도 하나의 배양 단계를 포함하고, 그리고 상기 항원에 특이적인
단일 단일클론 항체를 생산하는 B 세포의 클론 집단을 산출한다.
본 명세서 전반에서, "B 세포의 클론 집단"은 원하는 항체에 특이적인 단일 항체만을 분비하는 B 세포의 집단을
지칭한다. 다시 말하면, 이들 세포는 원하는 항원에 특이적인 단지 한 가지 유형의 단일클론 항체를 생산한다.
본 출원에서, 세포 집단 세포를 "농축하고"는 혼합된 세포 집단, 예를 들면, 원하는 항원에 대하여 면역화된 숙
주로부터 유래된 B 세포-포함 분리물 내에 포함된 원하는 세포, 전형적으로 항원-특이적 세포의 빈도를 증가시
키는 것을 의미한다. 따라서 농축된 세포 집단은 농축 단계의 결과로서 항원-특이적 세포의 더욱 높은 빈도를
갖는 세포 집단을 포함하지만, 이러한 세포 집단은 상이한 항체를 포함하고 생산할 수 있다.
포괄적인 용어 "세포 집단"은 복수 농축 단계가 수행될 때, 세포 집단이 농축전과 농축후 둘 모두 일 수 있다는
점을 염두에 두고, 농축전과 농축후 세포 집단을 포함한다. 가령, 한 구체예에서, 본 발명은 아래의 단계를 포
함하는 방법을 제시한다:
a. 면역화된 숙주로부터 세포 집단을 수확하여 수확된 세포 집단을 획득하는 단계;
b. 수확된 세포 집단으로부터 적어도 하나의 단일 세포 현탁액을 생성시키는 단계;
c. 적어도 하나의 단일 세포 현탁액을 농축하여 첫 번째 농축된 세포 집단을 형성하는 단계;
d. 첫 번째 농축된 세포 집단을 농축하여 두 번째 농축된 세포 집단을 형성하는 단계;
e. 두 번째 농축된 세포 집단을 농축하여 세 번째 농축된 세포 집단을 형성하는 단계; 그리고
f. 세 번째 농축된 세포 집단의 항원-특이적 세포에 의해 생산된 항체를 선별하는 단계.
각 세포 집단은 다음 단계에 직접 이용되거나, 또는 긴- 또는 짧은-기간 보관 동안 또는 후속 단계 동안 부분적
으로 또는 완전히 동결될 수 있다. 또한, 세포 집단으로부터 세포는 단일 세포 현탁액을 생성시키기 위하여 개
별적으로 현탁될 수 있다. 이러한 단일 세포 현탁액은 농축전 세포 집단으로서 기능하고 농축될 수 있다. 이후,
하나 이상의 항원-특이적 단일 세포 현탁액이 합쳐져 농축된 세포 집단을 형성한다; 이들 항원-특이적 단일 세
포 현탁액은 함께 모아질 수 있다, 가령, 추가의 분석 및/또는 항체 생산을 위하여 재-도말될 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명에서는 대략 50% 내지 대략 100%, 또는 그 내에 증분(increment)인 항원-특이적 세포 빈
도를 갖는 농축된 세포 집단을 생성시키기 위하여 세포 집단을 농축하는 방법을 제시한다. 바람직하게는, 농축
된 세포 집단은 대략 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, 또는 100% 이상의 항원-특이적 세포 빈도를 갖
는다.
다른 구체예에서, 본 발명에서는 세포 집단을 농축하는 방법을 제시하고, 여기서 항원-특이적 세포의 빈도는 적
어도 대략 2-배, 5-배, 10-배, 20-배, 50-배, 100-배, 또는 그 내에 증분으로 증가된다.
본 명세서 전반에서 용어 "증분"은 다양한 정도의 정밀도, 예를 들면, 10, 1, 0.1, 0.01 반올림 등으로 수치 값
을 정의하는데 이용된다. 이러한 증분은 임의의 측정가능 정도의 정밀도로 반올림될 수 있고, 그리고 범위의 양
측면에서 동일한 정도의 정밀도로 반올림될 필요는 없다. 가령, 범위 1 내지 100 또는 그 내에 증분은 20 내지
80, 5 내지 50, 그리고 0.4 내지 98과 같은 범위를 포함한다. 범위에 제한이 없을 때, 가령, 100 이하의 범위
또는 그 내에 증분은 100 및 측정가능 한계 사이에 증분을 의미한다. 가령, 100 이하 또는 그 내에 증분은
특징, 예를 들면, 온도가 0으로 제한되면, 0 내지 100 또는 그 내에 증분을 의미한다.
공개특허 10-2011-0112308
항원-특이성은 임의의 항원에 대하여 측정될 수 있다. 항원은 펩티드, 단백질 또는 이들의 단편; 탄수화물; 유
기와 무기 분자; 동물 세포, 세균 세포, 그리고 바이러스에 의해 생산되는 수용체; 효소; 생물학적 경로의 효능
제과 길항제; 호르몬; 그리고 사이토킨이 포함되지만 이들에 국한되지 않는, 항체가 결합할 수 있는 임의의 물
질일 수 있다. 전형적인 항원에는 IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-알파, IFN-감마, BAFF,
- 83 -