(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, 간세포 성장 인자(HGF)와 헵시딘이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
바람직한 항원에는 IL-6, IL-13, TNF-알파, VEGF-알파, 간세포 성장 인자(HGF)와 헵시딘이 포함된다. 1회 이상
의 농축 단계를 이용하는 방법에서, 각 농축 단계에 이용되는 항원은 서로 동일하거나 상이할 수 있다. 동일한
항원으로 복수 농축 단계는 항원-특이적 세포의 넓은 및/또는 다양한 집단을 산출할 수 있다; 상이한 항원으로
복수 농축 단계는 이들 상이한 항원에 교차-특이성을 갖는 농축된 세포 집단을 산출할 수 있다.
세포 집단의 농축은 항원-특이적 세포를 분리하기 위한 당분야에 공지된 임의의 세포-선별 수단에 의해 수행될
수 있다. 가령, 세포 집단은 색층분석 기술, 예를 들면, Miltenyi 비드 또는 자석 비드 기술에 의해 농축될 수
있다. 이들 비드는 목적되는 항원에 직접적으로 또는 간접적으로 부착될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 세포
집단을 농축하는 방법은 적어도 하나의 색층분석 농축 단계를 포함한다.
세포 집단은 또한, 당분야에 공지된 임의의 항원-특이성 분석 기술, 예를 들면, ELISA 분석 또는 할로 분석에
의해 농축될 수 있다. ELISA 분석에는 선택성 항원 고정화(가령, 스트렙타비딘, 아비딘, 또는 뉴트라비딘 코팅
된 평판에 의한 비오틴화된 항원 포획), 비-특이적 항원 평판 코팅, 그리고 항원 구축 전략(가령, 선택성 항원
포획, 그 이후에 이형(heteromeric) 단백질-항원 복합체를 생성시키기 위한 결합 대응물 첨가)이 포함되지만 이
들에 국한되지 않는다. 항원은 고형 매트릭스 또는 지지체, 예를 들면, 칼럼에 직접적으로 또는 간접적으로 부
착될 수 있다. 할로 분석은 세포를 항원-적하된 비드 및 B 세포를 수확하는데 이용되는 숙주에 특이적인 표지된
항-숙주 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 라벨은 예로써, 형광단일 수 있다. 한 구체예에서, 적어도 하나의
분석 농축 단계는 적어도 하나의 단일 세포 현탁액 상에서 수행된다. 다른 구체예에서, 세포 집단을 농축하는
방법은 적어도 1회의 색층분석 농축 단계 및 적어도 1회의 분석 농축 단계를 포함한다.
크기 또는 밀도로 세포 집단을 "농축하는" 방법은 당분야에 공지되어 있다(참조: U.S. 특허 5,627,052). 이들
단계는 항원-특이성으로 세포 집단을 농축하는 것에 추가하여, 본 발명의 방법에 이용될 수 있다.
본 발명의 세포 집단은 항원을 인식할 수 있는 적어도 하나의 세포를 포함한다. 항원-인식 세포에는 B 세포, 플
라스마 세포, 그리고 이들의 자손이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 한 구체예에서, 본 발명에서는 단일
유형의 항원-특이적 B-세포를 포함하는 클론 세포 집단을 제시한다, 다시 말하면, 이러한 세포 집단은 원하는
항원에 특이적인 단일 단일클론 항체를 생산한다.
이런 구체예에서, B 세포의 클론 항원-특이적 집단은 본 명세서에서 제공된 신규한 배양과 선별 프로토콜에 의
해 획득되는 항원-특이적, 항체-분비 세포로 주로 구성되는 것으로 생각된다. 따라서 본 발명에서는 또한, 적어
도 하나의 항원-특이적, 항체-분비 세포를 포함하는 농축된 세포 집단을 획득하기 위한 방법을 제시한다. 한 구
체예에서, 본 발명에서는 대략 50% 내지 대략 100%, 또는 그 내에 증분, 또는 대략 60%, 70%, 80%, 90% 이상,
또는 100%의 항원-특이적, 항체-분비 세포를 포함하는 농축된 세포 집단을 제시한다.
한 구체예에서, 본 발명에서는 예로써, 세포 집단으로부터 특정 B 세포를 선별하고 및/또는 특정 세포에 의해
생산된 항체를 선별하는 임의의 선별 단계 이전에, 숙주로부터 획득된 세포 집단을 농축함으로써 단일 B 세포를
분리하는 방법을 제시한다. 농축 단계는 1, 2, 3 또는 그 이상의 단계에서 수행될 수 있다.
한 구체예에서, 단일 B 세포는 단일 B 세포가 항원-특이성 및/또는 원하는 특성을 갖는 항체를 분비하는 지를
확증하기에 앞서, 농축된 세포 집단으로부터 분리된다.
한 구체예에서, 세포 집단을 농축하는 방법은 항체 생산 및/또는 선별을 위한 방법에 이용된다. 따라서 본 발명
에서는 항체를 선별하기에 앞서 세포 집단을 농축하는 단계를 포함하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 아래의
단계를 포함할 수 있다: 적어도 하나의 항원-특이적 세포를 포함하는 세포 집단을 준비하는 단계, 적어도 하나
의 항원-특이적 세포를 분리함으로써 세포 집단을 농축하여 농축된 세포 집단을 형성하는 단계, 그리고 적어도
하나의 항원-특이적 세포로부터 항체 생산을 유도하는 단계. 바람직한 구체예에서, 농축된 세포 집단은 한 가지
이상의 항원-특이적 세포를 포함한다. 한 구체예에서, 농축된 집단의 각 항원-특이적 세포는 이들로부터 항체
생산 세포를 분리하고 및/또는 상기 B 세포를 이용하여 항체를 생산하거나, 또는 이런 항체에 상응하는 핵산 서
열을 생산하기에 앞서, 클론 항원-특이적 B 세포 집단을 생성시키는 조건 하에 배양된다. 항체가 항원-특이적
세포의 낮은 빈도로 세포 집단으로부터 생산되는 이전 기술과 대조적으로, 본 발명은 항원-특이적 세포의 높은
빈도에서 항체 선별을 가능하게 한다. 농축 단계가 항체 선별 이전에 이용되기 때문에, 항체 생산에 이용되는
대다수의 세포, 바람직하게는 실질적으로 모든 세포가 항원-특이적이다. 항원 특이성의 증가된 빈도로 세포 집
단으로부터 항체를 생산함으로써, 항체의 양과 다양성이 증가된다.
공개특허 10-2011-0112308
본 발명의 항체 선별 방법에서, 항체는 바람직하게는, 항원-특이적 B 세포의 클론 집단을 발생시키는 농축 단계
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