(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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333, 525
415, 431
423, 439
475, 491
476, 492
478, 494
479, 495
480, 496
481, 497
483, 499
484, 500
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487, 503
488, 504
489, 505
545, 577
554, 570
556, 572
558, 574
562, 578
564, 580
566, 582
일정한 예시적인 구체예는 중간으로 또는 고도로 엄밀한 하이브리드화 조건 하에, 표 1에 열거된 예시적인 코딩
서열 중에서 하나를 보유하는 폴리뉴클레오티드에 하이브리드화되는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 또한 중간으
로 또는 고도로 엄밀한 하이브리드화 조건 하에, 표 1에 열거된 예시적인 코딩 서열 중에서 하나를 보유하는 폴
리뉴클레오티드와 동일한 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 하이브리드화되는 폴리뉴클레오티드, 또
는 전술한 폴리뉴클레오티드 중에서 하나에 의해 인코딩된 폴리펩티드를 포함한다.
공개특허 10-2011-0112308
구(句) "높은 엄밀도(stringency) 하이브리드화 조건"은 프로브가 전형적으로, 핵산의 복합 혼합물 내에서 표적
하위서열에 하이브리드화되지만 다른 서열에는 하이브리드화되지 않는 조건을 지칭한다. 높은 엄밀도 조건은 서
열 의존성이고, 그리고 상이한 환경에서 달라질 것이다. 더욱 긴 서열은 특히, 더욱 높은 온도에서 하이브리드
화된다. 핵산의 하이브리드화에 대한 광범위한 보도는 Tijssen, Techniques in Biochemistry and Molecular
Biology--Hybridization with Nucleic Probes, "Overview of principles of hybridization and the strategy
of nucleic acid assays" (1993)에서 확인된다. 일반적으로, 높은 엄밀도 조건은 정의된 이온 강도 pH에서 특정
서열에 대한 열용융점(Tm)보다 대략 5-10℃ 낮게 선택된다. Tm은 표적에 상보적인 프로브의 50%가 평형에서 표
적 서열에 하이브리드화되는 온도(정의된 이온 강도, pH, 그리고 핵 농도 하에)이다(표적 서열이 Tm에서 과량으
로 존재하기 때문에, 평형에서 프로브 중에서 50%가 점유된다). 높은 엄밀도 조건은 염 농도가 pH 7.0 내지 8.3
에서 대략 1.0 M 이하 나트륨 이온, 전형적으로 대략 0.01 내지 1.0 M 나트륨 이온 농도(또는 다른 염)이고, 그
리고 온도가 짧은 프로브(가령, 10개 내지 50개 뉴클레오티드)의 경우에 적어도 대략 30℃ 및 긴 프로브(가령,
50개 초과의 뉴클레오티드)의 경우에 적어도 대략 60℃인 조건일 것이다. 높은 엄밀도 조건은 또한, 불안정화제
(destabilizing agent), 예를 들면, 포름아미드의 첨가로 달성될 수 있다. 선택성 또는 특이적 하이브리드화를
위하여, 양성 신호는 배경 하이브리드화의 적어도 2배, 선택적으로 배경 하이브리드화의 10배이다. 전형적인 높
은 엄밀도 하이브리드화 조건은 아래와 같을 수 있다: 50% 포름아미드, 5×SSC, 그리고 1% SDS, 42℃에서 항온
처리, 또는, 5×SSC, 1% SDS, 65℃에서 항온처리, 그리고 65℃에서 0.2×SSC, 그리고 0.1% SDS에서 세척. 이런
하이브리드화와 세척 단계는 예로써, 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60분; 또는 그 이상 동안 수행될 수 있다.
높은 엄밀도 조건 하에 서로 하이브리드화되지 않는 핵산은 이들이 인코딩하는 폴리펩티드가 실질적으로 관련되
면, 여전히 실질적으로 관련된다. 이는 예로써, 핵산의 사본이 유전자 코드에 의해 허용되는 최대 코돈 축중성
을 이용하여 산출될 때 발생한다. 이런 경우에, 이들 핵산은 전형적으로, 중간 엄밀도 하이브리드화 조건 하에
하이브리드화된다. 예시적인 "중간 엄밀도 하이브리드화 조건"에는 37℃에서 40% 포름아미드, 1 M NaCl, 1% SDS
의 완충액에서 하이브리드화, 그리고 45℃에서 1×SSC에서 세척이 포함된다. 이런 하이브리드화와 세척 단계는
예로써, 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60분, 또는 그 이상 동안 수행될 수 있다. 양성 하이브리드화는 배경의 적어도 2
배이다. 당업자는 유사한 엄밀도의 조건을 제공하기 위하여 대안적 하이브리드화와 세척 조건이 이용될 수 있음
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