(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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실질적으로 포괄적인 보체, 다시 말하면, 항원의 다양한 별개의 에피토프에 결합하는 항체인 것으로 보이는 것
을 생산할 수 있는 항원-특이적 B 세포를 재현적으로 발생시키는 것으로 밝혀졌다. 이론에 한정됨 없이, 포괄적
인 보체는 최초 B 세포 회수에 앞서 수행되는 항원 농축 단계에 기인하는 것으로 가정된다. 게다가, 이러한 이
점은 이들 특성이 특정 항체의 에피토프 특이성에 따라 변할 수 있기 때문에, 상이한 특성을 갖는 항체의 분리
와 선별을 가능하게 한다.
둘째, 상기 B 세포 선별 프로토콜은 단일 B 세포, 또는 이의 자손을 포함하고, 전반적으로, 상대적으로 높은 결
합 친화성, 다시 말하면, 피코몰(picomolar) 또는 더욱 우수한 항원 결합 친화성으로 원하는 항원에 결합하는
단일 단일클론 항체를 분비하는 클론 B 세포 배양액을 재현적으로 생성시키는 것으로 밝혀졌다. 대조적으로, 기
존의 항체 선별 방법은 상대적으로 적은 높은 친화성 항체를 생성시키고, 따라서 치료 잠재력을 갖는 항체를 분
리하기 위하여 광범위한 스크리닝 절차를 필요로 하는 경향이 있다. 이론에 한정됨 없이, 상기 프로토콜은 숙주
의 생체내 B 세포 면역화(일차 면역화), 그 이후에 항원 표적에 특이적인 단일 높은 친화성 단일클론 항체를 분
비하는 회수된 클론 B 세포의 능력과 성향을 강화시키는 두 번째 시험관내 B 세포 자극(이차 항원 프라이밍 단
계)을 유발하는 것으로 가정된다.
셋째, 상기 B 세포 선별 프로토콜은 평균적으로, 원하는 표적에 고도로 선택성(항원 특이적)인 IgG를 생산하는
농축된 B 세포를 재현적으로 생성시키는 것으로 밝혀졌다(IL-6 특이적 B 세포로 본 발명에서 확인된 바와 같
이). 이들 방법에 의해 회수된 항원-농축된 B 세포는 앞서 논의된 바와 같은 에피토프 특이성의 원하는 완전한
보체를 산출할 수 있는 B 세포를 포함하는 것으로 생각된다.
넷째, 소형 항원, 다시 말하면, 100개 이하의 아미노산, 예를 들면, 5-50개 아미노산 길이의 펩티드와 함께 이
용될 때에도 이들 B 세포 선별 프로토콜은 소형 항원, 예를 들면, 펩티드에 대한 단일 높은 친화성 항체를 분비
하는 클론 B 세포 배양액을 재현적으로 발생시키는 것으로 밝혀졌다. 이는 소형 펩티드에 대해 높은 친화성 항
체를 생산하는 것이 일반적으로 매우 어렵고, 노동 집중적이고, 그리고 때때로, 가능하지도 않다는 점에서, 매
우 놀랍다. 따라서 본 발명은 원하는 펩티드 표적, 예를 들면, 바이러스, 세균 또는 자기항원 펩티드에 대한 치
료 항체를 생산하는데 이용될 수 있고, 따라서 매우 상이한 결합 특성을 갖는 단일클론 항체의 생산 또는 심지
어, 상이한 펩티드 표적들, 가령, 상이한 바이러스 균주들에 대한 단일클론 항체의 칵테일의 생산을 가능하게
한다. 이러한 이점은 원하는 결합가(valency)를 갖는 치료 또는 예방 백신, 예를 들면, 상이한 HPV 균주에 대한
보호 면역(protective immunity)을 유도하는 HPV 백신의 생산의 배경에서 특히 유용하다.
다섯 번째, 이들 B 세포 선별 프로토콜은 특히, 토끼로부터 유래된 B 세포와 함께 이용될 때, 내인성 인간 면역
글로불린에 매우 유사하고(아미노산 수준에서 대략 90% 유사한) 인간 면역글로불린에 매우 유사한 길이를 갖는
CDR을 포함하고, 따라서 잠재적인 면역원성 우려를 제거하기 위한 서열 변형을 거의 또는 전혀 필요로 하지 않
는(전형적으로, 기껏해야 소수의 CDR 잔기가 모 항체 서열 내에서 변형되고 골격 외인성 잔기가 도입되지 않은)
항원-특이적 항체 서열을 재현적으로 생성시키는 경향이 있다. 특히, 바람직하게는 이러한 재조합 항체는 항원
인식에 요구되는 숙주(토끼) CDR1과 CDR2 잔기, 그리고 전체 CDR3만을 포함할 것이다. 이로 인하여, 상기 B 세
포와 항체 선별 프로토콜에 따라 생산된 회수된 항체 서열의 높은 항원 결합 친화성은 심지어 인간화 이후에도
본래 상태로, 또는 실질적으로 본래 상태로 남아있다.
종합하면, 이들 방법은 기존에 알려졌던 것보다 더욱 효과적인 프로토콜의 이용에 의해 더욱 많은 별개의 에피
토프에 대해 더욱 높은 결합 친화성을 나타내는 항체를 생산하는데 이용될 수 있다.
특정한 구체예에서, 본 발명에서는 아래의 단계를 포함하는 방법으로, 원하는 항원에 특이적인 항체를 분비하고
적어도 하나의 원하는 기능적 특성, 예를 들면, 친화성, 친화력(avidity), 세포용해 활성 등을 선택적으로 갖는
단일 B 세포를 확인하는 방법을 제시한다:
a. 항원에 대하여 숙주를 면역화시키는 단계;
b. 숙주로부터 B 세포를 회수하는 단계;
c. 수확된 B 세포를 농축하여 항원-특이적 세포의 빈도를 증가시키는 단계;
d. 적어도 하나의 단일 세포 현탁액을 생성시키는 단계;
e. 배양 웰에 대해 단일 항원-특이적 B 세포의 생존에 우호적인 조건 하에 단일 세포 현탁액으로부터 하위-집단
을 배양하는 단계;
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공개특허 10-2011-0112308