(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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항체 Ab1이 생체내 효능을 나타낸다는 주장을 더욱 뒷받침한다.
실시예 11 RXF393 악액질 모형 2.
도입
두 번째 연구는 항체 Ab1로 치료가 후기 단계(이식후 10일과 13일자)에서 시작되고 치료 기간이 더욱 연장(이식
후 49일자까지)된 RXF-393 악액질 모형에서 수행되었다. 항체 Ab1로 투약 간격(dosing interval)이 7일에서 3일
로 단축되고, 그리고 일일 사료 소비 역시 측정되었다. 또한, 항체 Ab1로 최초 투약 시점에 종양 크기를 표준화
하려는 시도가 있었다.
방법
80마리, 6주령, 수컷 무흉선 누드 생쥐는 오른쪽 옆구리에서 RXF393 종양 단편(30-40 ㎎)이 피하 이식되었다.
종양이 270 - 320 ㎎ 크기에 도달한 20마리 생쥐가 선별되고 2가지 군으로 분할되었다. 한쪽 군은 10 ㎎/㎏ 항
체 Ab1이 3일마다, 그리고 다른 군은 10 ㎎/㎏ 다중클론 인간 IgG가 3일마다, 상기 시점(이식후 10일)부터 i.v.
투여되었다. 종양 크기가 400 - 527 ㎎에 도달한 다른 20마리 생쥐가 선별되고 2가지 군으로 분할되었다. 한쪽
군은 10 ㎎/㎏ 항체 Ab1이 3일마다, 그리고 다른 군은 10 ㎎/㎏ 다중클론 인간 IgG가 3일마다, 상기 시점(이식
후 13일)부터 i.v. 투여되었다. 나머지 40마리 생쥐는 본 연구에 더 이상 참여되지 않고 49일자에, 종양이
4,000 mm 3
에 도달할 때, 또는 매우 쇠약해지면(체중의 >30% 상실) 안락사되었다.
동물은 이식후 1일 내지 49일까지 3-4일마다 칭량되었다. 평균 체중 비율(MPBW)은 본 연구 동안 체중 감소를 모
니터하기 위한 일차 파라미터로서 이용되었다. 이는 아래와 같이 계산되었다: ((체중 - 종양 중량)/기준선
체중) x 100. 종양 중량은 이식후 5일 내지 49일까지 3-4일마다 측정되었다. 사료 소비는 270-320 ㎎ 종양 군의
경우에 10일자부터, 그리고 400-527 ㎎ 종양 군의 경우에 13일자부터 매일 측정되었다(각 치료 군에 의해 중량
으로 24시간 동안 소비된 양(g))
결과-생존
3일마다 10 ㎎/㎏ 항체 Ab1 i.v.(270-320 ㎎ 종양 크기), 그리고 3일마다 10 ㎎/㎏ 다중클론 인간 IgG
i.v.(270-320 ㎎ 종양 크기)에 대한 생존 곡선은 도 7에 제공된다.
3일마다 10 ㎎/㎏ 항체 Ab1 i.v.(270-320 ㎎ 종양 크기), 그리고 3일마다 10 ㎎/㎏ 다중클론 인간 IgG
i.v.(270-320 ㎎ 종양 크기)에 대한 평균 생존은 각각, 46일과 32.5일이었다(p=0.0071).
3일마다 10 ㎎/㎏ 항체 Ab1 i.v.(400-527 ㎎ 종양 크기), 그리고 3일마다 10 ㎎/㎏ 다중클론 인간 IgG
i.v.(400-527 ㎎ 종양 크기)에 대한 생존 곡선은 도 8에 제공되다. 3일마다 10 ㎎/㎏ 항체 Ab1 i.v.(400-527
㎎ 종양 크기), 그리고 3일마다 10 ㎎/㎏ 다중클론 인간 IgG i.v.(400-527 ㎎ 종양 크기)에 대한 평균 생존은
각각, 46.5일과 27일이었다(p=0.0481).
실시예 12 비-인간 영장류에서 항체 Ab1의 복수-투약 약동학적 평가
항체 Ab1은 인산염 완충된 염수에 담겨, 1마리의 수컷과 1마리의 암컷 필리핀 원숭이(cynomolgus monkey)에 단
일 일시 주사로 투약되었다. 혈장 시료는 고정된 시간 간격에서 채취되고, 그리고 항체 Ab1의 수준은 항원 포획
ELISA 분석의 이용을 통해 정량되었다. 비오틴화된 IL-6(50 ㎕의 3 ㎍/㎖)은 스트렙타비딘 코팅된 96 웰 마이크
로역가 평판 상에 포획되었다. 이들 평판은 세척되고 0.5% 비늘 젤라틴으로 차단되었다. 적절하게 희석된 혈장
시료가 첨가되고 실온에서 1시간 동안 배양되었다. 상층액이 제거되고 항-hFc-HRP 접합된 이차 항체가 적용되고
실온에서 방치되었다.
공개특허 10-2011-0112308
이들 평판은 이후, 흡출되고 항체의 양을 가시화시키기 위하여 TMB가 첨가되었다. 이후, 표준 곡선의 이용을 통
해 특이적 수준이 결정되었다. 항체 Ab1의 이차 용량이 35일자에 이들 동일한 2마리 필리핀 원숭이에 투여되고,
그리고 이러한 실험은 동일한 샘플링 계획을 이용하여 반복되었다. 결과의 농도는 이후, 도 9에 도시된 바와 같
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