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In-vitro-Maturation porciner Oozyten auf Feederlayer ... - Dragon IVF

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Im zweiten Versuch ( n= 162-307 <strong>Oozyten</strong>/Gruppe) wurde der Effekt eines <strong>In</strong>hibinantikörperhaltigen<br />

Ziegenserums <strong>auf</strong> die <strong>Maturation</strong> der porcinen <strong>Oozyten</strong> untersucht.<br />

Die Kontrollgruppe mit 10% <strong>porciner</strong> Follikelflüssigkeit zeigte die besten<br />

Reifungsergebnisse sowohl bezüglich der <strong>Maturation</strong>srate als auch der Expansion des<br />

Kumulus oophorus (83 und 87%). Anti-inhibinhaltige <strong>Maturation</strong>smedien waren<br />

gegenüber den Gruppen ohne <strong>In</strong>hibin mit 61 und 70% gegenüber 64 und 61% tendenziell<br />

überlegen. Ein Kontroll - Ziegenserum ohne <strong>In</strong>hibinantikörper, jedoch Hitze-inaktiviert,<br />

lieferte die deutlich schlechtesten Reifungsergebnisse (47%), so daß dem Zusatz des<br />

<strong>In</strong>hibin-Antikörpers ein reifungsfördernder Effekt zugeschrieben werden konnte.<br />

Der dritte Versuch ( n= 61-86 <strong>Oozyten</strong>/Gruppe) beschäftigte sich erneut mit<br />

unterschiedlichen Konzentrationen inhibinantikörperhaltigen Ziegenserums, wobei hier<br />

porcine Follikelflüssigkeit und nicht wie in Versuch 2 hitzeinaktiviertes Ziegenserum<br />

die Basis-Proteinquelle darstellte. Antikörperhaltige Medien waren bezüglich der<br />

<strong>Maturation</strong>srate gegenüber den Medien ohne Antikörper det Tendenz nach überlegen<br />

(71, 71und 65% gegenüber 58, 67 und 68%).<br />

<strong>In</strong> Versuch 4 ( n= 74-116 <strong>Oozyten</strong>/Gruppe) wurde mit 12 verschiedenen<br />

Versuchsgruppen neben einem Serumeffekt zusätzlich der Einfluß von zwei<br />

<strong>Feederlayer</strong>komponenten <strong>auf</strong> die <strong>In</strong>-<strong>vitro</strong>-<strong>Maturation</strong> <strong>porciner</strong> <strong>Oozyten</strong> überprüft. Alle<br />

Versuchsgruppen mit einem <strong>Feederlayer</strong> in der Reifungsphase (Buffalo-Rat-Liver-<br />

Zellen, BRL oder Eileiterfeederlayer, pEIL; Gruppe 2, 3, 5, 6, 8, 9 swie 11 und 12) waren<br />

gegenüber den Versuchsansätzen ohne <strong>Feederlayer</strong> signifikant überlegen. Das beste<br />

<strong>Maturation</strong>sergebnis mit 88% MII-Ozyten wurde mit 10% pFF und BRL-<strong>Feederlayer</strong><br />

erzielt, während nur 40% Metaphase II-<strong>Oozyten</strong> in einem Medium ohne Serum/pFF und<br />

ohne <strong>Feederlayer</strong> bestimmt wurden. Die Versuchsgruppen mit antikörperhaltigem<br />

Ziegenserum und pEIL oder BRL <strong>Feederlayer</strong>n waren den Gruppen mit nicht<br />

hitzeinaktiviertem Ziegenserum und pEIL oder BRL der Tendenz nach wiederum<br />

übelegen (81%, 78% gegenüber 74%, 70%). Die Versuchsgruppen 11 und 12 mit BRL<br />

oder pEIL ohne Serum oder porcine Follikelflüssigkeit lieferten dennoch Reifungsraten<br />

von jeweils 79%, womit deutlich wurde, daß ein <strong>Feederlayer</strong> die Funktion eines Serums<br />

in der <strong>In</strong>-<strong>vitro</strong>-Kultur ersetzten konnte.<br />

Zur Überprüfung der zytoplasmatischen <strong>Maturation</strong> wurden <strong>Oozyten</strong> in Versuch 5 in<br />

<strong>vitro</strong> fertilisiert und die Teilungsrate bestimmt und nicht bereits nach der Reifung<br />

angefärbt ( n= 109-139 <strong>Oozyten</strong>/Gruppe). Die Versuchsgruppen wurden mit neuen<br />

<strong>Oozyten</strong> besetzt, gereift und befruchtet, ohne die Versuchsgrupenanstellung von<br />

Versuch 3 zu ändern. Die in Versuch 3 zuvor schlechter abschneidenden<br />

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