In-vitro-Maturation porciner Oozyten auf Feederlayer ... - Dragon IVF

Färbetechnik, die eine Präparation des Karyotypes ohne Zerreißen der
zytoplasmatischen Membranen erlaubt.
2.10.3. Fluoreszenzfärbung mit Hoechst A 33342
Das DNA-spezifische Fluorochrome Hoechst A 33342 kann zur Sichtbarmachung von
Chromatin in Oozyten und Embryonen genutzt werden. Es handelt sich hierbei um
den Fluoreszenzfarbstoff Benzimid, 2`-[4Hydroxyphenyl]-5-[4-methyl-1-piperazinyl] -
2,5´bi-1H-bizimidazole (Sigma, Steinheim). Mittels dieser Methode ist es möglich, nach
vorangegangener morphologischer Beurteilung von Embryonen die Anzahl der Kerne
zu kontrollieren (VIUFF et al., 1991). Mitotisch aktive Kerne können als hellblaue,
scharf umrandete Strukturen identifiziert werden.
2.10.4. Fluoreszenzfärbung mit FDA
Eine Vitalitätsbeurteilung mittels FDA (3`6`-Fluorescein-Diacetate) wurde bereits in
den 70er Jahren von SCHILLING et al. beschrieben (SCHILLING & DÖPKE, 1978;
SCHILLING et al., 1979, SCHILLING & SMIDT, 1979). Mit Hilfe dieser
Färbemethode ist es möglich, sowohl die Integrität der embryonalen
Plasmamembranen als auch eine zytoplasmatische Enzymaktivität nachzuweisen
Lebensfähige Embryonen entwickeln nach nur kurzer Inkubationszeit in diesem
Fluochrom nach UV-Anregung eine leuchtend hellgrüne Fluoreszenz, während tote
Embryonen keine Farbreaktion aufweisen.
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