In-vitro-Maturation porciner Oozyten auf Feederlayer ... - Dragon IVF
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3.2.2. <strong>Maturation</strong>smedium<br />
10ml TCM199 mit Earle`s Salts und L-Glutamin (Tissue Culture Medium 199,<br />
# M-5017) wurden 70µg/ml Kanamycin, 5µg/ml PMSG (Pregnant Mare`s Serum<br />
Gonadotropin, <strong>In</strong>tergonan ® , <strong>In</strong>tervet, Toenisvorst) und 2 µg/ml hCG (human Choronic<br />
Gonadotropin, Ovogest ® , <strong>In</strong>tervet, Toenisvorst), 10 µl/ml einer <strong>In</strong>sulin (5µg/ml) -<br />
Transferrin (5µg/ml) -Natriumselenit (5ng/ml) -Mischung sowie 0,26 mM<br />
Natriumpyruvat zugesetzt. Das Reifungsmedium wurde <strong>auf</strong> eine Osmolarität von<br />
280mOsm/kg eingestellt wurde. Als Puffersystem dienten 25mM NaHCO3.<br />
Dieses Medium wurde mit 10% Protein unterschiedlicher Herkunft supplementiert.<br />
Dazu gehörten porcine Follikelflüssigkeit (pFF), Hitze-inaktiviertes östrisches<br />
Ziegenserum (ZS) und Fetales Kälberserum (FKS). ZS und pFF wurden weiterhin<br />
unterschiedliche Konzentrationen antiinhibinhaltigen Ziegenserums (Anti-INH)<br />
zugefügt. Weitere Versuchsansätze beinhalten den Einsatz von Eileiter- bzw. BRL-<br />
<strong>Feederlayer</strong>n in Kombination mit unterschiedlichen Proteinquellen.<br />
Vor der Benutzung wurde das jeweilige Medium mit einem 0,2µm Spritzenfilter<br />
(Sarstedt, Nümbrecht) in Vierlochschalen (Nunc, Wiesbaden, GLW, Würzburg) steril<br />
filtriert und im Brutschrank bei 39°C und 5% CO2 für mindestens zwei Stunden <strong>auf</strong><br />
einen pH-Wert von 7,4 äquilibriert.<br />
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