In-vitro-Maturation porciner Oozyten auf Feederlayer ... - Dragon IVF

werden mußte. Dies war bei der Giemsa-Metode nicht notwendig, da die Präparate
sofort nach Fixierung gefärbt und beurteilt werden konnten.
5.3.In-vitro-Entwicklung in vitro gereifter und befruchteter Oozyten
Da das Erreichen der nuklearen Reife einer Oozyte nur den halben Weg zur
Befruchtung darstellt, mußte die zytoplasmatische Reife ebenfalls untersucht werden.
Die zytoplasmatische Reifung der Oozyten kann nicht mit einer Färbung nachgewiesen
werden, sondern wurde durch eine In-vitro-Fertilisation der Oozyten überprüft. So
wurden die Oozyten der Versuche 3, 4 und 5 mittels Lacmoid-Färbung auf ihre nukleare
Reife untersucht. Die Versuchsanstellungen wurden in den Versuchen 6, 7 und 8
beibehalten, und mit neuen Oozyten besetzt, um Aussagen über die zytoplasmatische
Reifung durch Befruchtungsversuche herauszuarbeiten.
Zwar nur tendentiell, aber dennoch unübersehbar brachten Versuchsgruppen mit dem
Zusatz von hitzeinaktiviertem Ziegenserum trotz schlechterer Maturationsraten bessere
Befruchtungsergebnisse. Somit konnten in Gruppen mit nicht hitzeinaktivierten
Ziegenseren nahezu 50% der Oozyten auch befruchtet werden. Die Ergebnisse lassen die
Vermutung zu, daß im nicht hitzeinaktivierten Ziegenserum embryotrophe Stoffe
vorhanden sind (z.B.. Transferrin, Fibronectin), welche die frühembryonale Entwicklung
fördern. Die nukleare Maturation einer Oozyte könnte möglicherweise durch die von
CHANG (1949) postulierten ovoziden Faktoren eingeschränkt werden. Auch BARG
(1994) überprüfte die Entwicklungsrate von Mäuseembryonen, die in einem Medium
kultiviert wurden, das mit einem nicht hitzeinaktiviertem Serum supplementiert
worden war. Sie bestätigte die Ergebnisse von CHANG (1949) und stellt eine
verminderte Entwicklungsrate und –geschwindigkeit der Embryonen fest. Die
Ergebnisse dieser Arbeit lassen den Schluß zu, daß mit der Zugabe des nicht
inaktivierten Serum von Ziegen eine Art Selektion der Oozyten stattfindet, denn von
den maturierten Oozyten konnten dann 50% befruchtet werden.
Auch PINYOPUMINTR & BAVISTER (1994b) stellen in ihren Untersuchungen an
Rinderembryonen fest, daß eine Hitzeinaktivierung von Blutseren nicht notwendig ist.
Durch die unterlassene Inaktivierung bleiben embryotrophe Eigenschaften im Serum
erhalten. Die Autoren vermuten sogar eine Entwicklung von eher embryotoxischen
Substanzen durch die Hitzeinaktivierung des Serums. Ebenso können TODOROV et al.
(1993) keine Hitzeinaktivierung rechtfertigen, denn in ihren Untersuchungen mit
93