In-vitro-Maturation porciner Oozyten auf Feederlayer ... - Dragon IVF

unabhänig, so daß geschlossen werden kann, daß die Regulation der
Kumulusexpansion beim Schwein unterschiedlich zu der von Nagetieren ist.
Bei der In-vitro-Fertilisation von Schweineoozyten resultiert die hohe Polyspermierate
unter anderem aus der fehlenden kortikalen Reaktion. Unzulänglichkeiten in der Invitro-Maturation
scheinen hierfür der Grund zu sein. CRAN & CHENG (1986)
schlagen deshalb eine Supplementierung von Calciumionophore zum Medium vor, da
die Dispersion der kortikalen Granulae vom intracellullären Calciumgehalt abhängt.
Die Senkung der Polyspermierate kann auch durch eine Insemination mit einer
Spermiendichte von 2 x 10 3 erreicht werden (RATH, 1992). Auch porcine
Follikelflüssigkeit soll während der Maturation einen entscheidenen Effekt auf die
Senkung der Polyspermierate haben (FUNAHASHI et al., 1994a)
Die Untersuchungen von OCAMPO et al. (1994) und KIKUCHI et al. (1995) zeigen,
daß porcine Spermatozoen in vitro bereits 3 Stunden nach Zugabe zum Medium die
Oozyte erreichen und kurz darauf in das Ooplasma eindringen. Durch die Fusion mit
der Zona pellucida wird die Arretierung aus der Metaphase II aufgehoben. 6-9 Stunden
danach findet die Ausschleusung des zweiten Polkörpers und 12-18 Stunden später die
männliche und weibliche Vorkernbildung statt, während DING et al. (1992a) bereits
schon nach 8 Stunden den männlichen und weiblichen Vorkern identifizieren können.
24 Stunden später kann die Verschmelzung (Syngamie) der Vorkerne beobachtet
werden.
In der Embryonalentwicklung in vitro zeigen Schweineembryonen einen sogenannten
Zellblock; daß heißt, sie entwickeln sich nur sehr schlecht über das 2-4 Zellstadium
hinaus (DAVIS, 1985; REED et al., 1992; PETTERS, 1992). Außerdem erstreckt sich
die Phase des 4-Zell-Stadiums beim Schwein über einen großen Zeitraum (POLGE,
1982). Der Grund ist eine unzureichende Aktivierung des embryonalen Genoms in
diesem Zellteilungsstadium, indem die Steuerung der Proteinsynthese vom
maternalen auf das fetale Genom umgeschaltet wird (GANDOLFI & MOOR, 1987,
BARNES & EYESTONE, 1990). Schweineembryonen zeigen nach In-vitro-Fertilisation
nur eine geringe Fähigkeit zu einer weiteren Entwicklung (TORRES & RATH, 1992).
Eine Möglichkeit, die In-vitro-Zellblock-Barriere zu überwinden ist, die in vitro
erzeugten Embryonen in situ in einen Eileiter zurückzutransferieren
(WHITTINGHAM & BIGGERS, 1968). Weiterhin kann eine Embryokultur auf
Feederlayern, die aus Eileiterzellen bestehen, über diesen Entwicklungsblock
hinweghelfen (WHITTINGHAM & BIGGERS, 1968). Daraus kann geschlossen werden,
daß die Zusammensetzung herkömmlicher Kulturmedien nicht optimal ist
(GANDOLFI & MOOR, 1987).
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