THESE Anne POSTEC Diversité de populations microbiennes ...

Matériel et méthodes
L’étanchéité est assurée par un empilement de cinq joints toriques. Lorsqu’elles ne sont pas
utilisées, les entrées peuvent être condamnées par des tiges en verre pleines.
La sonde de température est une sonde classique PT 100 recouverte de Teflon PTFE
(Radley, UK).
La sonde de pH est une électrode stérilisable à gel (Mettler Toledo).
Le condenseur (Radleys) est un condenseur classique de chimie, en verre. Il est relié à
un bain réfrigérant (HS40, Huber) contenant de l’eau et un antigel dont la circulation continue
permet la condensation des vapeurs d’eau de l’effluent gazeux en sortie de cuve, dues aux
températures de culture élevées (60 à 90°C).
Les lignes d’entrée et de sortie du milieu de culture sont réalisées en tuyaux
Tygon ® Silicone (Masterflex, Norton) qui assurent la liaison entre le bioréacteur et les deux
bidons en polypropylène (Nalgène). Ces bidons, de 20 ou 50 litres, sont équipés d’un
bouchon vissant percé de trois entrées dont un évent fermé par un filtre (0,22 µm, Gelman).
Les entrées et sorties de milieu sont assurées par des pompes péristaltiques (Masterflex). La
pompe d’entrée permet de fixer le débit d’arrivée du milieu, et ainsi le taux de dilution de la
culture. Dans le cas de cette étude, le milieu frais contient du soufre, c’est pourquoi il est
placé sous agitation afin de maintenir le soufre en suspension.
Les lignes d’entrée d’acide (HCl 1 N) et base (NaOH 1 N) sont réalisées de façon similaire
(tuyaux Tygon ® Silicone, pompe péristaltique, flacon Nalgène d’un litre avec bouchon vissant
à trois entrées).
La régulation de pH et de température est assurée par un système analogique de
contrôle : le NBS BioCommand Interface (4-20 mA controller). Il est relié à un ordinateur et
associé au logiciel NBS Local Controller. Ce logiciel collecte les mesures du pH-mètre et de
la sonde de température d’une part. D’autre part, il commande les pompes d’addition d’acide
et de base ainsi que le bain-marie programmable (Huber) afin d’ajuster les valeurs de pH et
de température mesurées aux valeurs de consigne fixées par l’expérimentateur. Le logiciel
informatique AFS BioCommand permet d’acquérir et de stocker l’ensemble des paramètres
mesurés au cours d’une fermentation. Le système analogique et les deux logiciels sont
conçus par la société New-Brunswick (Nejmegen, Pays-Bas).
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