THESE Anne POSTEC Diversité de populations microbiennes ...

Matériel et méthodes
nm) = f (temps). Le temps de génération G est égal à Ln2 / µ max . Pour chaque condition, les
trois répétitions de culture ont permis le tracé de trois courbes de croissance et le calcul de
µ max pour chacune. Le µ max moyen correspondant assorti d’un intervalle de confiance a été
reporté sur un graphique représentant les différents µ max moyens en fonction de la valeur du
paramètre étudié. La courbe permet de déterminer visuellement la valeur du paramètre
(parmi celles testées) pour laquelle la croissance de la souche étudiée est maximale. Un
exemple de calcul en présenté en annexe 3.
4.3.1 Température
Pour déterminer l’effet de la température, des milieux GYPS pH 6 ont été préparés en
tube. Dans un premier temps, deux cultures en tube sont réalisées sur milieu GYPS-pH 6
pour les températures : 22°C, 30°C, 37°C, 50°C, 60°C, 70°C, 80°C et 90°C (mesure de
l’absorbance toutes les heures). La détermination de l’optimum a été obtenue par réalisation
de trois cultures en tube sur milieu GYPS-pH 6 pour les températures : 30°C, 35°C, 40°C,
45°C, 50°C, 55°C, 60°C, 65°C, 70°C et 75°C (mesure de l’absorbance toutes les 30 min).
4.3.2 pH
Pour l’étude de l’influence du pH, des milieux GYPS à différents pH ont été préparés.
Les cultures ont été réalisées à 60°C. Pour déterminer les "bornes", deux tubes ont été
inoculés pour chacun des pH suivants : 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 et 10. Pour déterminer les optima,
trois tubes ont été inoculés pour les pH : 4,5 ; 5 ; 5,5 ; 6 ; 6,5 ; 7 ; 7,5 ; 8 et 8,5. La
préparation des milieux a nécessité l’utilisation de différents tampons :
- MES à 3,9 g. L -1 pour les milieux de pH 5,5 à 6,5 ;
- PIPES pour les milieux à pH 7 ;
- HEPES pour les milieux de pH 7,5 à 8 ;
- AMPSO pour les milieux de pH 8,5 à 10.
4.3.3 Salinité
Des milieux GYPS à pH 6 de différentes salinités ont été préparés. Les
concentrations en Sea Salts testées dans un premier temps sont : 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60,
70, 80, 90 et 100 g. L -1 , puis de 5 à 75 g. L -1 (par incrément de 5 g. L -1 ) pour la détermination
de la salinité optimale. Ces cultures ont été réalisées à 60°C.
NB : 30 g. L -1 de Sea Salts correspondent à 21,9 g. L -1 de NaCl.
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