THESE Anne POSTEC Diversité de populations microbiennes ...

Résultats complémentaires - Chapitre 2
4 Effet de filtrats de Thermococcales sur la thermotolérance de
Marinitoga piezophila (KA3)
Pour rechercher une explication à la détection de microorganismes a priori
thermophiles modérés dans la culture d’enrichissement à 90°C, nous avons testé
l’hypothèse d’une possible ‘thermotolérance’ acquise grâce à l’activité des Thermococcales
présents dans l’enrichissement. Les sous-cultures n’ayant pas permis d’accéder aux
bactéries détectées par leur séquence, nous avons choisi de tester l’effet de filtrats de
Thermococcales, sur la croissance de la souche décrite Marinitoga piezophila, dont des
séquences proches (99% d’identité des ADNr16S) ont été détectées dans le bioréacteur.
- Effet du milieu F1 sur la température de croissance de Marinitoga piezophila
Les cinétiques de croissance de M.
0,02
piezophila ont d’abord été suivies lors de la
croissance de la souche sur le milieu F1 utilisé
dans notre étude pour la réalisation des cultures
0,015
d’enrichissement en continu. Les cultures ont été
réalisées en fiole de 20 mL avec trois répétitions
0,01
pour chacune des températures suivantes : 60, 65,
70, 75, 80, 85 et 90°C.
0,005
Alors qu’aucune croissance n’était observée
lors de la description de l’optimum de température
sur milieu RS (Alain et al. 2002a), une faible
croissance a été détectée sur milieu F1 à 75 et
0
60 65 70 75 80 85 90
Température (°C)
80°C. Cependant, l’optimum reste autour de 65°C Figure 3 : Vitesses maximales de
croissance en fonction de la température,
dans les deux études.
de la souche M. piezophila cultivée sur
milieu F1.
µ (min-1)
- Effet de filtrats de cultures de Thermococcales sur la croissance de M. piezophila
Les deux souches isolées à partir de la culture d’enrichissement en continu à 90°C,
Thermococcus sp. AT1260 (notée T) et Pyrococcus sp. AT1261 (notée P), ont été cultivées
sur milieu F1 à 80 et 90°C respectivement. Des filtrats de culture ont été récupérés pour
chacune de ces souches en phase exponentielle (notée E) et en phase stationnaire (notée
S) par centrifugation de 300 mL de culture puis filtration à 0,22 µm des surnageants. Des
mélanges de filtrats et de milieu F1 frais ont été réalisés dans les proportions suivantes :
0/100, 50/50 et 100/0 (v/v). Les 4 filtrats (TE, PE, TS et PS) aux différentes proportions ont
été inoculés avec la souche M. piezophila et trois répétitions ont été réalisées pour chacune
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