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Résultats complémentaires - Chapitre 2 des températures d’incubation suivantes : 70, 80 et 90°C. Des dénombrements cellulaires ont été réalisés à T1 (+4h) et T2 (+8h) soit la fin de la phase exponentielle et la moitié de ce temps. Globalement, les densités cellulaires déterminées indiquent une bonne croissance à 70°C, une faible croissance à 80°C, et une absence de croissance à 90°C. Les filtrats TS100 et PS100 donnent des densités maximales plus faibles : ces milieux ayant déjà servi à la croissance de Thermococcus sp. AT1260 et Pyrococcus sp. AT1261 jusqu’en phase stationnaire sont probablement limitant en matière organique pour permettre l’obtention de fortes densités cellulaires de M. piezophila. Les densités cellulaires déterminées à T1 (+4h) semblent indiquer que les filtrats obtenus à partir des cultures de Thermococcales en phase exponentielle (TE et PE) stimuleraient la croissance de M. piezophila, par une diminution de la phase de latence et/ou par une augmentation de sa vitesse de croissance à 70 et 80°C (température supra-optimale). Ceci suggère une éventuelle thermoprotection conférée par ces filtrats de culture de Thermococcales. Au vu de ces résultats, de nouvelles cultures contenant des filtrats de Thermococcales ont été réalisées en flacon pour tenter de cultiver les bactéries a priori thermophiles modérées détectées par leur séquences dans le bioréacteur (notamment Marinitoga sp.) (voir Tableau 3). Les milieux utilisés étaient les suivants : TE50, PE50, TS50, PS50, TE100, PE100, TS100 et PS100. Une série de ces milieux a été réalisée avec soufre, l’autre sans soufre. Les températures d’incubation étaient 70 et 80°C. Ces cultures n’ont pas permis de recultiver de bactéries à partir d’échantillons du bioréacteur. Pour poursuivre l’étude physiologique de M. piezophila, des expériences supplémentaires ont été envisagées mais n’ont pas réalisées par manque de temps. Sur des milieux contenant des filtrats de Thermococcales, les vitesses maximales de croissance auraient pu être déterminées par réalisation de cinétiques sur chacun des milieux, afin de détecter un éventuel effet stimulant d’un ou plusieurs de ces milieux sur la croissance de M. piezophila. Des expériences de culture en flacon ou en bioréacteur auraient également pu être réalisées pour tenter de cultiver M. piezophila jusqu’à 90°C, température à laquelle une souche de la même espèce a été détectée dans le bioréacteur, par adaptation progressive de la souche à des températures supra-optimales (65°C → 90°C). Au-delà du test des filtrats de culture, l’effet d’extraits cellulaires de Thermococcus sp. et Pyrococcus sp. sur la thermotolérance de M. piezophila auraient pu être exploré. Des molécules thermoprotectrices pourraient être libérées dans le milieu lors de la lyse cellulaire. On peut encore envisager que la croissance de Thermotogales thermophiles modérés (e.g. M. piezophila) pourrait être favorisée à des températures supra-optimales lors de cultures mixtes avec des Thermococccales. 166
Résultats complémentaires - Chapitre 2 Cellules. mL -1 Cellules. mL -1 Figure 4 : Densités cellulaires moyennes obtenues à T1 (+ 4 h d’incubation) et T2 (+ 8 h d’incubation) lors de la croissance de M. piezophila à 70°C et 80°C sur différents milieux à base de filtrats de cultures de Thermococcales (T = Thermococcus sp. AT1260, P = Pyrococcus sp. AT1261, E = phase exponentielle, S = phase stationnaire). La croissance sur milieu F1 (milieu de la culture d’enrichissement en bioréacteur) sert de témoin. 167
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